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[转帖]为什么我们需要使用特定的血浆蛋白分析仪?

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郑振寰 发表于 2008-3-18 13:54 | 显示全部楼层 |阅读模式

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一.这是血浆检测技术发展的要求。
血浆蛋白的检测方法进展极快,按照时间顺序和重要性来说,其经历了以下几个阶段
I) 定性和半定盘阶段,包括区带电泳技术.琼脂内免疫单扩散技术(目前仍广泛应用于临床检验) .火箭免疫电泳法(也是目前各实验室常用技术)和免疫固定电泳法等、这些方法学的缺点是敏感度不苗、方法繁琐啥影响因素较多而降低了使用价值。
2) 定母的免疫快速比浊法测定血浆蛋白质比浊法测定技术是快速、自动、微击测定血浆蛋白最新手段。而比;虫法也有以下两大类型。
I.直接比浊 是较老的技术,大都用于自动生化分析仪和一些简单的小型 POCT 仪器。
其采用一般比浊计测定液体中颗粒浓度,由于是测定直接的光通量,方法比较粗糙、不一定比原有定性方法学更准确,但其方法简便、还受基层单位欢
迎。
21投射光比浊法:这种技术是最近十几年以来发展出来的一种广泛采用的探测技术,被认为是测定液相抗原抗体反应的经典技术之一.其覆盖浓度范围从 g/l 到μg/l. 尤其适用于血浆蛋白的检测要求,可以用来检测体液中的大多数蛋白质,包括脑脊液、尿液和血浆/血清。
3 乳胶增强散射免疫比浊法。胶乳免疫测定法 (Latex Immuno-Assag)这是近年来出现的一种微量非同位素检查技术。 i方法是利用微小的乳胶颗粒( 1
μ 土)联接抗体后,在液相中和相应抗原结合后产生浊度或散射光的变化等技术来测定抗原含量。这种技术,利用胶乳颗粒结合散射法,可以大大增强血浆蛋白的检测性能,用于 SAA 的检测,敏感性可< Img/L 故目前成为血浆蛋白检测的金标准技术。
一般地来说,散射法好过透射法(直接比浊法 ) .尤其结合使用乳胶增强技术时,其灵敏度可以提高 1000 倍以上 ι 同时其受到非特异性反应的影响也大大减少,因而精确度和重复性皆较好。那么我们为什么不能使用透射法?因为样本的光吸收度不仅取决于复合物的浓度,还受到其交联区域的很大影响,所以由于透射法光探测技术的限制,光强度既不能太高也不能太低,所以测定范围较窄,其使用较短波长得到的结果也会明显高于使用较长波长时。
二.这是由抗原抗体皮应的特性所决定的。
抗原抗体反应由于其特定的检测性能,容易受到以下因素的影响

1、由于抗原过量造成的临床假阴性结果。
使用动态散射法的主要优点是可以获得更宽的测定范围,通常可以覆盖到32 或 64 倍的初始范围,可以满足各种生理或病理状态下血浆蛋白浓度的测定
要求,并能将重测的要求和抗原过量的危险降到最低。此外,使用乳胶增强技术可以进一步保证减少抗原过量的危险.这些多价试剂的 HeidelbergerKendall曲线具有更宽的等价区,更容易保证反应条件的最优化。
2 内源性和外源性复合物的干扰,如溶血,黄瘟.高脂血异嗜性抗体,类风湿因子.细胞/颗粒药物等。
而由溶血 \ 黄瘟和有色药物造成的光谱干扰,都不会影响免疫比浊法的结果!
而由异晴性抗体 h A MA 类凤湿因子(Rr)等造成的干扰可以通过项目程序的优化设计将其;咸至最小如德灵公司采用的高样本稀释度和封闭试剂等。由高
脂血(高甘油三脂血)造成的潜在干扰可以通过以下方式将其减至最小高样本稀释度,和/或在项目混合物中包含去污剂。最后由颗粒产生的散射光的稳定
偏差可以用动力学的评价进行补偿(定时或速率)。在特定蛋白检测系统上使用的上述这些措施都是为了进一步保证蛋白检测结果的准确性排除非特异性反应的干扰。
三.这是抗体系统和检测性能的要求。
除了这些仪器检测系统方面的要求,一个很好的抗体试剂系统还需要具备以下几个特点才能满足上述的检测性能要求
I) 亲和性很高,线性范围超出正常参考值的上下各 50% 以上

2} 具有抗原过量检测能力 e 排除假阴性结果的干扰
3) 灵敏度达到相应项目的临床要求
4) 精密度(即重复性)达到 10% 以下
事实上除了使用散射法的特定蛋白检测系统,传统的检测方法学,包括定性、半定量以及生化检测方法都无法达到以上的各项要求。
四.这是由蛋白检测j项目在临床应用的发展所决定的。
血浆蛋白的检测具有十分重要的临床意义。在某些慢性疾病的诊断方面,血浆蛋白检测的实验室项目仍然是目前最早期的诊断指标,如慢性肾病等(见附录
中血浆蛋白检测的临床意义)。随着检测技术的发展,有越来越多要求更高灵敏度的新项目被开发出来并投入到临床检验实践中,造福子广大的患者和临床专家。
而生化检测仪由于使用透射比浊法,其精度受到相应的限制,最高检测灵敏度达到 μg/mL。随着技术的改进,很多生化检测仪增加了免疫项目的测定如生理浓度含量较大的免疫球蛋白和白蛋白等,大多数厂商提供的可以在生化检测仪上做的免疫项目都大同小异。
但由于人体内的血浆蛋白数:fLl:众多,临床价值各异,相应的生理含量从 g/ml 到ng/mL. 形成的免疫复合物也各有特点,所以由于受限于使用的方法学,认为生化检测系统可以完成对血浆蛋白的测定任务在目前是不现实的 。

比较认可的专业的特种蛋白检测系统是散射法,它可以将检测灵敏度提高到ng/mL. 从而增加了很多具有独特临床价值的蛋白检测项目,如超敏 c- 反应蛋白 ISAA. Cystatin C. 尿 al- 微球蛋白,脑脊液检测等。
总之,恃定蛋白分析仪是专门设计用于检测血浆蛋白的仪器它使用经典的散射比浊法,使用蛋白检测所需的特定稀释度(l:l 到 1:64000).可以进行抗原过
检测可以标记非特异性反应异常的样本,例如使用浊度标记 (XL 具有广泛的测定范围ι 从而系统地适用于检测广泛的血浆/血泊,脑脊液和尿液蛋白菜单,此外,它还有专门配套设计的试剂保证了结果的质量标准。而非特定的分析仪不是设计用于检测血浆蛋白指标,它使用更早期的吸收度改变原理,例如透射法,使用直接添加小样本由来进行稀释(不能保证反应基质的一致);大多数没有抗原过量监测功能,标记主要设计用于临床化学指标,不能涵盖蛋白检测的要求,主要针对生化参数,所以蛋白检测菜单很少如用于脑脊液和尿液的检测灵敏度不够要求,由于多种原因的影响,例如灵敏度不够,造成测定范围过窄等。

所以一台专业的使用散射法的 特定蛋白仪器既符合实验室免疫检测和临床发展的需要,也适合流程管理和质量系统的优化。

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