建立自动生化分析仪室内质控时应注意的几个问题

建立自动生化分析仪室内质控时应注意的几个问题
张克坚 苏增留 张传宝
本文作者张克坚先生卫生部临床检验中心临床化学室主任医学博士研究员
苏增留先生张传宝先生临床检验与诊断学硕士
关键词: 生化分析仪 室内质控
室内质量控制是实验室质量保证体系中的重要组成部分其目的是为了保证
每个患者样本的测定结果的可靠性测定结果的可靠性包括两方面的含义一是
精密度高即测定结果的重复性好实验室每天测定的结果变化很小主要要消
除或减小随机误差造成的影响这主要靠建立健全的室内质控体系来保障; 另一
个方面是准确度即测定结果正确接近真值主要要消除或减小系统误差的影
响这可以通过选用好的测定方法进行正确校准及参加室间质评活动来保证
以上两点并不是孤立的精密是准确的基础没有高精密度的测定结果就无从
谈准确度因此实验室要想获得可靠的结果建立一套健全的室内质控系统是
一切质量工作的基础
对于如何建立室内质控系统卫生部临床检验中心起草了一部临床实验室
定量分析室内质量控制工作指南(草案) 可供大家参考在此想结合这一工作指
南的有关内容及我们在日本7170A 自动生化分析仪上建立室内质控系统的一些体
会向大家做一介绍
一 测定系统的概念
做好室内质控是各实验室保证测定结果长期保持良好的再现性的重要措施
对于相同的临床测定项目如所用方法的测定原理试剂仪器校准品中任何
一个不同都可能得到不同测定结果特别是一些酶活性的测定由于目前国际
上尚未建立标准体系各实验室测定结果的差异仍很大这就要求我们首先要建
立测定系统的概念测定系统包括测定原理试剂仪器校准品这4 个要素
中的任何一个不同都可认为是不同的测定系统因此我们要想得到准确可靠的
测定结果要想使测定结果与国际或国内其他实验室具有可比性最好建立一个
标准的测定系统在自动生化分析仪上使用配套的试剂和校准品
例如日本自动生化分析仪应尽量使用日本分析仪专用的试剂和校准品配套产
品(如宝灵曼公司专为日本分析仪提供的的试剂校准品) 如欲使用其它厂家或
国产的试剂应在对其进行充分评价确保其测定结果可靠时方可使用而对于校
准品不可随意更换如绝对不可用贝克曼的校准血清校准日本生化分析仪反
之也不能用宝灵曼的校准血清校准贝克曼生化分析仪不恰当地使用校准品会造
成人为的系统误差
二 校准的方法
校准的作用是为了减少或消除仪器试剂等造成的系统偏差进行校准首先
要选择合适的校准品对于不同的仪器最好选择仪器生产厂家提供或推荐的产品
例如日本系列的分析仪和宝灵曼的试剂可选用宝灵曼的校准品(c.f.a.s) 贝克曼分
析仪和贝克曼试剂可选用贝克曼的校准品校准品最好为人血清基质可减少基
质效应造成的误差值得强调的是绝不能用定值质控血清作为校准品使用因为
两者是有着很大区别的不恰当地使用校准品会造成人为的系统误差会将校准
品的误差转移甚至放大到测定结果中因此必须引起我们的重视
校准的频度应根据不同的项目情况分别对待部临检中心曾在日本自动生化
分析仪上进行了探讨我们每天在开机后使用宝灵曼公司的校准品进行校准 (宝
灵曼试剂) 连续数月对十几个项目K 值的变化进行了观察分析(表1) 发现多数
项目K 值是比较稳定的但某些项目K 值变化的幅度较大影响K 值的因素有
试剂及校准品的稳定性瓶间差批间差仪器的稳定性等所以应根据不同情
况分别采取每天校准更换试剂时校准和定期校准等不同的校准方法例如Ca
的K 值变化很明显经对变化曲线进行分析发现由于试剂稳定性的原因K 值逐
渐升高当更换新试剂后K 值又恢复到较低水平对这种情况最好采用经常校准
的方法较好有的项目不同瓶之间的K 值有较大差异可在更换试剂时进行校准
对于K 值比较稳定的项目可不必频繁校准这反而会增加因校准的随机误差而
造成人为误差的危险对这类项目可采用定期校准及试剂批号改变时校准的方法
下面再单独谈谈酶活性测定的校准问题对这个问题目前有多种主张有
的主张不进行校准而使用固定的K 值; 但也有很多学者认为应进行校准
酶学项目测定时K 值:
酶活力(U/L)=Δ A/min V 106/(ε v l)
Δ A/min 每分钟吸光度的变化
V 样本体积与试剂体积之和
v 样本体积
l 比色杯光径(cm)
ε 摩尔消光系数
如令K=V 106/(e v l)
则酶活力(U/L)=Δ A/min K
常用K 值的种类有以下几种:
(1) 真实K 值: 根据测定系统实际性能设定的K 值;
(2) 理论K 值: 根据理论摩尔消光系数(e)设定的K 值;
(3) 实测K 值: 根据实测ε 设定的K 值
(4) 校准K 值: 利用酶校准物直接校准得到的K 值;
(5) 厂家K 值: 厂家提供的K 值
目前在我们实验室因条件所限还无法得到真实K 值我们在日本自动生化分
析仪上分别观察了几种酶的理论K 值实测K 值和校准K 值并进行了比较分
析从我们得到的数据可看出(表2) 实测K 值与理论K 值间存在一定的差距
多数情况实测K 值大于理论K 值这一现象说明分析仪的测光系统还存在一定的
误差如波长波的纯度以及测光过程等的偏差使仪器达不到理论上的最佳状
态校准K 值与实测K 值之间也存在着一定的差距即使指示物和仪器相同其
差异也有较大不同这部分差异主要是由试剂校准品造成的
根据我们的实验结果作者认为在实际工作中最好使用校准K 值但这应有
两个先决条件一是所用试剂的质量应该有保障我们不仅要拥有好的仪器同
时也必须使用与其相配套的试剂不然单凭好的设备也不能保证测定结果的质量;
二是要使用高质量的校准品且其校准值应适合所用分析系统
目前困扰我们使用校准K 值的问题是酶活性校准品的溯源性欧洲标准局
(BCR)和美国国家标准技术研究院(NIST)均发表了人血清基质的酶活性标准物
IFCC 也将重新修订酶学的推荐方法(将温度改为37 ) 相信很快就会有具有溯源
性的常规校准品问世
三 室内质控图的制作
根据质控物的测定结果制作质控图是室内质控的重要一环通过质控图可
帮助我们发现常规分析中的误差寻找可能的原因并有助于纠正常用的质控
图有大家非常熟悉的Levery-Jennings 质控图近年来Yoden 图的使用越来越普遍
无论制作哪种室内质控图都要先解决以下几个问题才能完成: 选择合适的质控
血清并确定其靶值和标准差
1. 质控血清的选择
选择什么样的质控血清是首先遇到的问题根据不同分类方法质控血清可分
为多种如根据血清物理性状可有冻干质控血清液体质控血清和冷冻混合血清
等; 根据血清靶值的确定与否可有定值质控血清和非定值质控血清; 根据血清基
质的来源可分为人血清基质质控血清动物血清基质质控血清人造基质质控血
清等实验室应根据自己的实际情况认真选择
作为较理想的质控血清至少应具备以下特性:
(1) 人血清基质因它的基质效应小;
(2) 无传染性
(3) 添加剂和调制物的数量尽可能少;
(4) 瓶间变异小酶类项目一般瓶间CV%应小于2%; 其它分析物CV%应小
于1%;
(5) 冻干品其复溶后稳定2~8 时不少于24h -20 时不少于20 天; 某些
不稳定成分(如胆红素ALP 等)在复溶后前4h 的变异应小于2%;
(6) 到实验室后的有效期应在1 年以上
卫生部临检中心曾对9 个国内外公司(6 个国外公司3 个国内公司)生产的临
床化学质控血清进行了一次初步评价评价的内容包括14 个分析项目的瓶间差
稳定性及标定值与测定值之差从初步评价的结果来看各公司产品间还是存在
着一定的差异特别是国产质控血清的质量还需进一步提高
2. 质控血清的处置
质控血清的保存特别是冻干质控血清的复溶都应认真小心按要求处置如
处理不当就会造成人为误差我们曾对冻干质控血清的复溶过程(加水混匀)进
行了详细观察
a. 加水量(精密度准确度)
我们多人使用同一标定的吸管手工连续20 次取5.0mL 纯水用分析天平称
重并计算每个人操作的精密度和准确度同时与自动注加器加样的结果进行了比
较发现个人之间还存在一定的差异手工操作的精密度和准确度都不如自动注
加器另外很多影响手工操作的环节不易控制建议最好采用固定的注加器
b. 混匀
冻干质控血清加水后一定要按说明书的要求在室温静置30min(避光) 然后轻
轻混匀禁止用力摇晃避免产生泡沫不按要求操作会影响很多项目的值
我们分别对按和不按要求操作的质控血清的测定结果进行了对比分析不按说明
书要求粗暴操作会使一些脂类酶类项目的测定结果偏低影响质控结果的准确
性
3. 质控血清靶值及标准差的确定
室内质控使用的质控血清的靶值无论是定值还是非定值质控血清都应自行测
定都应在自己实验室常规条件下进行由于每个实验室使用的仪器试剂校
准品不同采用定值质控血清商家提供的靶值往往容易出现偏差
靶值的确定可分两步进行首先确定暂定靶值即将20 次独立批测定结果的
均值作为暂定靶值并按此靶值进行质控然后每月进行累积下一个月以累计
均值作为靶值将5 个月的累积均值作为今后长期质控的靶值但个别项目由于
质控血清稳定性的缘故需不断进行调整如葡萄糖的值有逐渐下降的趋势需
不断调整靶值
表3 表4 为我们在日本7170 生化仪上用宝灵曼试剂测定宝灵曼定值质控血
清的结果可见我们测定结果的均值与宝灵曼公司提供的靶值间尚存在一定的差
异
可使用5 个月累积质控血清测定结果的标准差作为质控图上的控制限应区
分最佳条件下的变异(OCV)和常规条件下的变异(RCV) 我们曾在数日内在日本
7170 自动生化分析仪上反复测定质控血清20 次由于这些测定都是在最佳条件
下进行的得到的CV 为OCV 所以值均很小(表5 表6) 如以此结果作为质控
图的控制限做质控会造成很多不必要的浪费在使用此控制限的第1 个月我
们的失控报告达到47 份
四 质控方法的选择
质控方法(Quality Control Proce-dure)包括质控规则质控物的数量及测定质
控的频率
不同质控规则的性能特征即失控概率与分析误差大小的关系可用功效函数图
表示功效函数图随质控物数的不同而不同图1 图2 分别为检出系统误差和
随机误差的功效函数图可见对随机误差的检出要难于对系统误差的检出
在实际工作中根据功效函数图设计质控方法比较复杂最近Westgard 又提出
了一套更简洁的方法OPSpecs 图方法任何实验室都可用此方法非常简便地设
计出各自的质控方法具体步骤如下:
(1) 规定质量要求即根据质量目标确定各个分析项目的最大允许误差(TEa);
(2) 对本实验室所用分析方法的不精密度和不准确度做出评价即确定各个
分析项目的标准差(s)和偏差(Bias);
(3) 根据TEa s Bias 做出各个项目的功效函数图临界误差图OPSpecs
图
(4) 评价在本实验室目前条件下的误差检出概率(Ped)和假失控概率(Pfr);
(5) 选择各个项目适宜的质控规则确定测定质控结果的个数
以卫生部临检中心的在日本7170 自动生化分析仪上测定Glu 为例:
(1) 根据美国CLIA88 的要求Glu 的最大允许误差(TEa)为10%;
(2) 本实验室测定Glu 的标准差(s)为0.08(CV%=1.29); 根据参加澳大利亚
病理化学质量保证计划室间质评结果本实验室测定Glu 结果的偏差(Bias)为
0.68%
(3) 将TEa s Bias 输入计算机使用专用软件(Westgard Validator 1.1)就可
得到OPSpecs 图(图3)
(4) 设定在目前条件下本实验室的误差检出概率(Ped)要大于90% 假失控概
率(Pfr)要小于5%;
(5) 由OPSpecs 图可知只要选用1-3.5s 规则每批测定1 个质控物就可以达
到90%以上的误差检出率而假失控率则为0.00%
以上只是一个简单的例子不同分析项目均可按此步骤选择不同的质控方法
五 失控的处理
失控时应按以下程序进行处理:
1. 填写失控报告上报实验室负责人;
2. 简单迅速地回顾整个操作过程分析查找最可能发生误差的因素;
3. 如果未发现明显差错可按以下步骤进一步查找原因:
a. 立即重新测定同一质控品此步主要是用以查明人为误差每一步都应认
真仔细操作以查明失控原因; 另外这一步还可以查出偶然误差如是偶然误
差则重测的结果应在允许范围内(在控) 若重测结果仍不在允许范围则可以
进行下一步操作
b. 新开一瓶质控品重测失控项目如果新开的质控血清结果正常那么原
来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质或者被污染若结果仍
不在允许范围则进行下一步
c. 新开一批质控品重做失控项目若结果在控说明前一批血清可能都有
问题检查它们的有效期和贮存环境以查明问题之所在如果结果仍不在允许
范围则进行下一步
d. 进行仪器维护重测失控项目检查仪器状态查明光源是否需要更换
比色杯是否需要清洗或更换对仪器进行清洗等维护另外还要检查试剂此时
可更换试剂以查明原因如果结果仍不在允许范围则进行下一步
e. 重新校准重测失控项目用新的校准液校准仪器排除校准液因素
f. 请专家帮助如果前五步都未能得到在控结果那可能是仪器或试剂的原
因只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了
以上只是多年来我们在自己的工作中总结出的一些经验体会及教训其中
肯定还有不完善之处希望能对各临床实验室建立一套完整的室内质控体系有所
帮助
全文完

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天哪，我还没看到这个帖子，这是从哪里复制的？怎么会没有标点符号呢？大体从内容上看，还是不错的。抓紧改改吧，或者把原文的PDF文件发上来，我们来处理。

这么好的帖子让人看着这么费劲

这是篇很有指导意义的文章，拜读！

呵呵，文章写的不错有借鉴学习的地方，但是怎么真的没有标点符号啊！看着好累。