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1目的
保证GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪的正常使用。
2 该SOP变动程序
本文件的变动,可由任一使用该文件的工作人员提出,报经室技术负责人,由季度组长会议决定。如通过则公布实行。
3 适用范围
GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪。
4 使用方法
⑴依次打开电脑显示器和电脑主机电源开关,进入Windows 2000界面。
⑵接着打开PCR仪电源开关,预热5分钟。
⑶按需要在电脑上设定一个新的运行版面和程序。
⑷推开滑门,将样品放入样品槽内,关上仪器滑门。
⑸运行程序,在反应结束后按Save键储存实验结果。
⑹关闭PCR仪电源开关。
⑺分析实验结果;发放临床报告。
5 注意事项
⑴仪器应放置在水平坚固的平台上,外界电源系统电压要匹配,并要求有良好的接地线。
⑵环境温度保持在23℃左右,湿度保持在60%左右。
⑶仪器应配备功率≥3000W的稳压器。
⑷仪器应定期清洁维护。
⑸仪器使用时应严格遵守上述使用步骤。
6 维护方法
6.1微软Windows 2000操作系统的维护
硬盘驱动器每月29日运行一次碎片清除程序,使用Norton Utilities或类似软件。现以Norton为例:
①放入Norton Utilities光盘,运行安装(Setup)文件。
②安装完后取出Norton Utilities光盘,重新启动计算机
③运行Norton Utilities软件,并启动其清理碎片/优化程序。
④运行完成后,检查以确信无严重错误记录,退出Norton Utilities。
⑤以后每次运行Norton Utilities软件中的清理碎片/优化程序就行了。
6.2 7000 PCR扩增仪的维护
1.样品槽的清洁
样品槽每月29日进行一次清洁,如出现样品槽污染情况则随时清洁。
操作方法:
①运行25℃HOLD程序使样品槽温度达到室温。关闭仪器,等待10分钟。
②从样品槽移去样品架。
③在样品槽中加入少量95%乙醇,用棉签擦洗反应孔。
④用干棉签吸干乙醇。
⑤向里推动滑门,锁住,使样品槽升温到50℃,以蒸发掉多余的乙醇。
2.热盖的清洁
热盖每月29日进行一次清洁,如有需要随时进行。
①运行25℃HOLD程序使样品槽温度达到室温。关闭仪器,等待10分钟。
②逆时针旋转GeneAmp 7000光源检测器顶部旋钮。向后推GeneAmp 7000光源检测器至滑轨距离的大约1/3处。
③GeneAmp 7000光源检测器滑轨上有缺口。从这些缺口垂直抬起GeneAmp 7000光源检测器,小心侧放于仪器顶盖上。不要从仪器取走热盖。
④用湿润的镜头纸清洁加热盖,待干。
⑤将GeneAmp 7000光源检测器重新安装回滑轨。
6.3 GeneAmp 7000光路系统的维护
1.调准ROI参照条
调准ROI参照条在仪器更换卤素灯、仪器定期校准或仪器维修后进行。不得由一般实验人员进行该项操作。
①推开滑门,在样品槽中放入荧光检测板。
②GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽,并关紧。
③从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。
④积分时间从512ms开始,用位置调整点,调节ROI的高度与右边线。
⑤逐渐增加积分时间,直到可以看到至少四个块(约4096ms)。
⑥调整最左侧位置调整点。
⑦减少积分时间到1024ms,调整上方与底部的位置调整点。
⑧减少积分时间以便最右侧块可见但未饱和(约512ms),调节最右侧位置调整点。如有需要用右上角拖动点调整图象的倾斜度(以左上角为中心旋转)。
⑨调节后的参照条宽度必须在ROI参照块间有小空隙。
2.校正ROI光路
ROI光路校正每月29日进行一次,以便确信结果仍然是优化的。
①推开滑门,在样品槽中放入荧光检测板。
②GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽,并关紧。
③从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。
④点选Show ROI复选框。每个样品孔周围出现一蓝色椭圆圈。
⑤点选Show Saturation复选框。
⑥设定积分时间为1024ms;打开卤素灯和光闸。
⑦点击LIVE按钮获取图象,然后在任何地方左击停止。获取中等程度未饱和图象(无红色图象)。
⑧从Edit菜单中选择Calibrate ROIs每个孔都会选取合适的ROI,确定96孔都被蓝色椭圆圈正确界定。
⑨图象太亮太暗都会出现错误信息,相应增加或减少积分时间,并重复上述第8步直到无错误信息出现。
⑩检查孔ROI位置,所有孔信息都应包含在96个ROI椭圆圈中。如果没有,重复8和9步。
3.检查样品槽的荧光污染
检查样品槽的荧光污染每月29日进行一次,如有需要随时进行。
①开启GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪电源。
②从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。
③从样品槽中移去反应板。GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽,并关紧。
④单击New Document建立一个新的GeneAmp 7000文件
⑤点击instrument中的catibrate显示ROI inspector窗口
⑥把Exposure Time调到最大,把Capture image From调到最敏感的FiterB点,单击Snapshot获取图象。
⑦减少积分时间,改变Capture image From中的A,B,C,D单击Snapshot
观察96孔中背景荧光。如孔有显著荧光则表示该孔存在荧光污染。
⑧按照样品槽的清洁程序清洗样品槽。
4.更换卤素灯
仪器使用大约2000小时后应更换卤素灯。
①关闭仪器,冷却15分钟。
②将样品板放入仪器样品槽,关闭滑门。在仪器的顶部向上打开灯舱门。
③拧下固定灯罩的螺丝,将灯罩向前滑移,使其从设备上取下。
④将旧灯泡向前滑移,使其从夹状支架上取下,并将灯泡从灯座上拔下。
⑤把新灯泡尾部的插杆插入灯座上的插孔,使二者连接起来。
⑥使灯的长轴与仪器前向平行(即竖直于地面),将新灯泡滑回灯位。
⑦在灯舱门处于打开状态下,打开仪器,确证在仪器运行时灯也能打开。
⑧盖上灯罩,拧紧螺丝,关上灯舱门。
⑨若新卤素灯不工作,GeneAmp 7000电源保险丝可能有问题。
7 校准
GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪为复杂精密仪器,其校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议定期校准以外,以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。
⑴通过对室内质控图的分析,我们可以及时发现系统误差的出现。经过分析排除了试剂和人员误差后,应怀疑是否仪器出现了检测偏差需要校准。此时进行仪器状态效验实验确定是否需要进行仪器校准。
⑵仪器状态效验试验
①使用标准化试剂作为效验试剂。
②在仪器处于校准状态下,由固定人员用标准化试剂对102、103、104、106标准品进行扩增实验。该实验在两个月内应进行20次。分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。
③每年6月、12月由固定人员进行上述实验,观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和102标准品是否检出。
④当102标准品未检出、标准曲线的三个参数超出控制范围或仅出现后者时,先排除实验的人员、试剂因素,再重复实验。如结果依然,联系厂家立即进行仪器校准。
⑤当仅有102标准品未检出时,检查实验全过程。再次上机检测102标准品
两枚。仍未检出联系厂家进行仪器校准。
⑥仪器经过校准后,重复该实验。结果归入仪器档案。
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