溶血剂对单通道血球分析仪的影响
刘继敏
(湖北省武汉市黄陂区前)l1医院检验科430300)
[摘要]由于溶血剂是决定血细胞分析仪检测准确性的一个重要因素，所以为了提高血球分析仪的准确性，为临床治疗提供有意义的参考。本研究分析了溶血刺溶血时间长短及溶血剂用量多少与血球分析仪测定结果的关系。结果发现随着溶血时问延长．溶血剂用量加大，淋巴细胞和中间细胞计数(MID)比例有逐渐增加趋势，而中性粒细胞计数(GR_AN)有下降趋势。
关键词：溶血剂血细胞分析仪临床治疗
中图分类号：R446 文献标识码：B 文章编号：1672—5085(2008)5．0190--03
随着医学科技的日新月异，自动血细胞分析仪已得到普遍应用。传统的参考方法由于血液稀释不易准确，结果会产生较大的误差。国际血液学标准化委员(ICSH)推荐使用单通道血液分析仪计数细胞代替直接计数法 ，并在1994年进行了修订，将其确定为参考方法。由于血细胞分析仪的检测准确性取决于很多因素，所以只有认识这些因素，才能排除干扰，使血球计数更加准确，为临床治疗提供有意义的参考。其中，溶血剂是血细胞计数仪试剂中的主要试剂。它能将红细胞膜溶解，并能使WBC的体积发生规律性变化，从而使WBC分类成为可能，是影响血红蛋白测量和白细胞计数及分类的重要原因之一
。本文就溶血剂用量及溶血时问与血球分析仪测定结果的关系进行了分析。
1材料与方法
1．1仪器和试剂
TAK—II单通道血液分析仪及其配套溶血制、稀释液和冲洗液。
1．2标本
取健康成年男性静脉血2．0 ml，共30例。用乙二胺四乙酸二钾(EDTA KZ，1．5 mg／m1)抗凝，2h内测定。
1．3 方法
1．3．1按仪器要求比例加入稀释液、血液和溶血剂，在不同时间测定WBC分类。
1．3．2将溶血剂用量依次设为500、550、600、?? 、800ul，其它参数保持不变。用同一份抗凝血在不同溶血剂用量的程序下各测3次，取其均值作为测定结果。观察淋巴细胞计数(LYM)、MID、GRAN、白细胞(WBC)和血红蛋白(HGB)值的变化。
2结果
随着溶血时间延长，淋巴细胞和MID比例有逐渐增加趋势，而GRAN有下降趋势。详见表1。
溶血剂用量在500至800ul内WBC和HGB测定值基本保持恒定。但白细胞分类计数结果差异显著。随着溶血剂用量的增加，LYM逐渐增高，至650ul后则变化不大，总变化率为14．6％ ，MID受影响最大，升幅达233．3％，GRAN值则明显下降，变化率为24．9％。详见表2。
3讨论
溶血剂是血细胞计数分析仪试剂中最主要的成份。它在稀释液的配合下使用，能使红细胞膜在极短的时间内完全溶解，使各种WBC维持颗粒状态，并保持一定的体积，从而保证了WBC计数的可靠性。将释放出的血红蛋白转化为稳定的血红蛋白衍生物，便于同时定量测定血红蛋白浓度。 除此之外，具有WBC分类功能仪器所用的溶血剂尚需对WBC具有修饰作用。
能在规定时间内控制各类WBC内容物的释放，维持其体积大小。有关溶血剂对细胞的修饰作用与细胞膜表面脂蛋白的存在有关，膜表面脂蛋白对溶血剂中的表面活性剂有淬灭作用，膜表面脂蛋白越多，表面活性剂对细胞膜的破坏作用越弱。在各种细胞中，RBC膜脂蛋白极少，淋巴细胞次之，单核细胞和嗜酸嗜碱细胞一般，中性粒细胞最多，因此，红细胞与溶血剂接触后很快被破坏，淋巴细胞膜也部分破坏，胞内容物释出，使残存的细胞模与核相连，单核细胞有不同程度破坏，嗜酸、嗜碱性细胞由于其核为杆状并含有大量颗粒，它们的膜破坏不全，从而保持较大的体积。中性粒细胞由于膜脂蛋白丰富，它受表面活性剂的影响最小，故能保持原有体积不变。膜脂蛋白和表面活性剂分子均具有亲水和疏水基团，从化学的角度考虑，二者能相互结合，形成微胶束。溶血剂中的表面活性剂能与膜脂质作用，破坏膜的双层脂质结构，使脂质的排列秩序混乱，并渗入双层脂质之间和脂质层内，使两层脂质之间距离加大，结构疏松，肿胀脂质层局部断裂。在膜的表面，表面活性剂积聚，依照“相似相溶”的原理，形成一由密到疏改变的表面活性剂层。这一表面活性剂层由于其疏水基团较大，为不良导体，加之膜结构疏松、肿胀，从而使粒细胞在血细胞计数分析仪上的表观体积变大。但是，随着表面活性剂浓度增大和作用时间延长，膜结构进一步变化，开始崩解，脂质被表面活性剂乳化，细胞浆流出，细胞表面体积变小，乃至于胞浆完全流出和胞膜消失。膜脂蛋白能与溶血剂中表面活性剂结合，从而使游离表面活性剂的局部浓度暂时降低，而各类WBC的膜脂蛋白含量存在差异，因而在合适的表面活性剂浓度和一定的溶血时间内，能使中性粒细胞保持原有体积或变大，单核细胞，嗜酸性细胞、嗜碱性细胞较小、淋巴细胞最小，红细胞全部溶解。
溶血剂对各类WBC的选择性作用，有赖于合适的浓度和一定的溶血时间。尽管中性粒细胞由于其富含膜脂蛋白而对表面活性剂有抵抗作用，但是，如果溶血剂中表面活性剂浓度过高或作用时间延长，超出了中性粒细胞所能承受的限度，中性粒细胞膜亦会受损，细胞体积变小，甚至成为裸露的核。这提示在使用可调整溶血剂体积或体外加入溶血剂的仪器，控制好溶血剂的用量和溶血时间，是获得可靠结果的关键。增加溶血剂的用量不但能够造成溶血剂的浪费，而且也影响到血球计数仪测定值的准确性。
参考文献
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