[转帖]临床生化诊断试剂盒的选择与评价

一、试剂盒的性能指标
（一）准确度
通常以回收率、定值血清的靶值范围、对照试验及干扰试验的结果来分析判断。
1．回收试验 回收率越接近100%，准确率越高，一般以100%±5%为合格。
2．定值血清的测定 对于某些无法准确加入标准物的试剂盒，可用低、中、高浓度的定值血清进行测定，测得值符合定值血清的靶值范围（ ±2S）为合格。
3． 对照试验 将被检试剂盒与公认的参考方法同时测定若干样本（一般要求100份，最少需30份），计算两组结果的相关系数和直线回归方程。相关系数γ越接近1.0、斜率b越接近1.0，截距a越接近0，则准确度越高。相关系数要求在0.9～1.0之间，γ值符合要求不等于准确度都符合要求。b表示比例偏差，a表示恒定 偏差。（1-b）×100%表示比例偏差的大小。（a值/样品含量）×100%表示恒定偏差的大小。
4．非特异性与干扰试验 对维生素C、黄疸、溶血、乳糜等因素的耐受程度，干扰值越小越好。
（二）精密度
试剂的瓶间差异、批内精密度和批间差异三组测定的平均值之间应无显著差异，否则，试剂盒的均一性不符合要求。
1．瓶间差异 同一试剂盒，取10瓶试剂复溶，测定同一样品的含量，求平均值、标准差、变异系数。
2．批内精密度 同一样品用同一瓶试剂测定10次，求平均值、标准差、变异系数。
3．批间差异 同一样品，用不同批号的10瓶试剂测定，求平均值、标准差、变异系数。
（三）线性范围
指 该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。被检样品的含量超出测定线性范围，必须改变样品与试剂体积的比例，重新测定才能得到准确结果。试剂盒的测定线性 范围是衡量试剂盒质量的一个指标，也是正确使用该试剂盒的关键之一。试剂盒测定线性范围要求能覆盖该项测定的常见医学决定水平。测定线性范围太窄时，常规工作中需调整标本量，重做的标本多，造成人力、物力、财力和时间的浪费。测定线性范围也不必过大，否则，成本高，价格贵，原材料浪费。
观察试剂盒的测定线性范围时，应用真实标本如定值血清或标准液操作，高浓度标本含量应超过说明书上规定线性上限的20%，整个线性需要五组不同的浓度，每组均需测定三次，并求平均值。
（四）抗干扰作用
双 试剂型试剂盒主要优点是抗干扰作用。如ALT双试剂盒的第一试剂能排除内源性丙酮酸干扰。此种试剂盒的第一试剂加入被检血清后，37℃5分钟内显示 NADH被消耗、340nm吸光度值下降的曲线，当内源性丙酮酸被消耗完，吸光度曲线平坦，加入第二试剂后，340nm吸光度立即上升，当ALT酶促反应发生后又下降。这种反应曲线显示了ALT双试剂具抗干扰作用。甘油三脂测定双试剂的排除游离甘油的作用，可加入甘油标准液后进行试验，以证实排除游离甘油 的能力。
（五）灵敏度
在终点法灵敏度以特定波长下1cm光径时单位浓度的吸光度值表示，如胆固醇酶法测定试剂盒要求其灵敏度 A500nm0.005时的胆固醇浓度相当于0.08mmol/L。连续监测法以特定波长下1cm光径单位酶活性的吸光度值表示，试剂盒质量合格时，其灵敏度值与理论计算的ΔA/min×因数值一致。试剂盒的质量与灵敏度密切相关，灵敏度达不到要求的试剂盒不宜使用。
（六）稳定性
试剂盒稳定性是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其性能指标的期限。该期限应符合规定的储存期。方法有以下三种。
1．原包装试剂的稳定性 按说明书的保存方法储藏，于不同时期取出一瓶复溶，测定试剂吸光度值、标准品含量、定值血清含量、线性范围、酶促反应时间曲线或化学反应速度时间曲线及其他性能指标，直到这些指标变化超出规定值的10%以上的期限，为原包装试剂的稳定期。
2．复溶后试剂的稳定性 将复溶试剂分别放在4℃、25℃保存，逐日与新复溶试剂对比，观察上述指标（见原包装试剂稳定性），直到测定结果与新复溶试剂的差值>10%以上，这一期限为复溶后试剂的稳定期。
3．不同温度下的保存期 将原包装试剂盒置25℃、37℃、45℃、4℃保存，以出现说明试剂变质的指标来确定在不同温度下的保存期。

二、选购试剂盒的要求和注意事项
（一）选购试剂盒的一般要求
1．所采用的测定方法特异性好，灵敏度、准确度、精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO等推荐的方法性能。
2．试剂盒的储存期至少为1年。
3．水溶性、低粘性、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、不污染环境。
4．所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO推荐的标准和要求。
（二）选购试剂盒的注意事项
1． 首先要仔细阅读试剂盒的说明书，对试剂盒选用方法有所了解，科学研究工作时应选择参考方法试剂盒，医疗预防工作应选择推荐的常规方法试剂盒，或选择公认的 测定方法试剂盒。此外，对试剂盒的组成、方法性能指标加以分析，是用于手工操作，还是用于自动分析仪。属于后者，其实验参数是否与本单位自动分析仪的实验参数相符。
2．有无卫生部的批准文号。凡已列入卫生部临床检验体外诊断试剂审批管理范围的试剂盒，没有生产批准文号的，不应使用。对有生产批准文号者，也需考察生产厂家的信誉。
3．对试剂盒的包装、理学性能、方法学性能指标进行考察和检测，并经实际应用。符合说明书规定及本室实验要求者方可选购。
4．根据本单位的日工作量、分析仪试剂用量、试剂复溶后4℃稳定期等因素综合分析，应选购合适包装，近期出厂的产品。
5．注意季节对试剂质量的影响。一般在气温较低的季节购买试剂，防止试剂盒在运输途中变质。
6．在确保试剂盒质量前提下，应选购价格低的产品。 第四节 试剂盒的性能评价方法

为了确保诊断试剂盒的质量，国家卫生部于1992年开始颁发了38种临床生化诊断试剂"质量检定暂行标准"，使诊断试剂的生产、检定和销售走上了规范化道路。

一、说明书审查
说 明书是用户了解和正确使用试剂盒的指南。审查内容包括：①试剂名称；②用途；③测定原理和技术要求；④试剂盒内的包装内容；⑤适用仪器；⑥标本要求；⑦测 定步骤及注意事项；⑧贮存的条件及有效期；⑨性能特征，包括准确度、精确度、特异性、受干扰的程度、线性范围、参考范围；⑩生产单位名称、地址、邮编及电话。

二、理学检验与评价
理学检验的内容有：①外包装应完整牢固，封口严密，标签清晰；②有详细的用户说明书，卫生部批准的生产文号，生产日期，有效期和保存条件；③粉剂型应均匀无凝块，不粘附瓶壁；④液体型试剂应无沉淀，无混浊，无渗漏；⑤复溶后或液体试剂的pH应符合标准规定。

三、性能指标的检验与评价
（一）线性范围的测定
试 剂盒的线性范围，既是衡量其质量的重要指标，也是保证正确使用和鉴定试剂盒的关键指标之一。一般试剂盒的线性范围应能覆盖临床上的参考值范围和常见疾病的 医学决定水平，以减少样品稀释重测的机会。一旦线性范围变窄即应废弃。造成线性范围变窄的原因常见的有：①生产中组份投料量不足；②生产后组分稳定性差； ③运输和贮存不当等。（检验方法见第六章方法学线性评价）
（二）观察时间反应曲线
酶活性测定时用中等酶活性的定值血清，代谢产物测 定时用稍高于参考值上限的标准液或定值血清，按说明书规定对样品进行测定，每2s～10s记录一次吸光度，连续监测15min。同时用蒸馏水代替样品做试剂空白的时间反应曲线）。以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图，观察动态期（包括延迟期、线性期、混合期）和平衡期出现、持续和终止的时间，分析有关 的性能指标。
1．终点法 ①试剂空白的吸光度是否符合规定标准，否则会影响测定的精密度和准确度；②试剂空白的时间反应曲线应平坦，且无明显波动，否则，说明试剂本身不稳定，会导 致测定偏差；③反应能否在规定的时间内达到平衡，达到平衡的时间应在终点法读取测定吸光度的时间之前。反应速度慢的原因，常为试剂中酶量不足或酶质量不好，或反应条件不是最适条件；④反应达到平衡后，吸光度最大并维持不变，这一期间为反应平衡期，终点法测定应在这一期间读取吸光度。
2．连续监测 法 ①试剂空白值是否符合规定，吸光度下降型的反应，试剂空白吸光度应在1.5左右，吸光度上升型的试剂空白吸光度越低越好，不符合说明书中规定值者不宜使用；②试剂空白的时间反应曲线应平坦，吸光度变化（△A/min）应≤0.001，若大于此值，表明试剂本身分解变化，会使测定结果产生误差；③延迟期、 线性反应期与设定的实验参数是否相符，若不相符应予修改；④观察时间反应曲线的斜率，通过定值血清，分析试剂盒的灵敏度。当试剂盒中底物浓度不足，辅助酶或指示酶的酶量不足或质量不好，反应条件不是最适条件等情况时，时间反应曲线斜率下降，灵敏度低，测定结果有严重比例误差，这种试剂盒无法纠正，不能使 用。
（三）稳定性试验
稳定性是指试剂在不同状态和不同条件贮存后保持其测定准确性的能力。大多数试剂盒具有原包装形式和使用时的工作液两种形式，少数试剂盒的原包装即为工作液。评估试剂盒的稳定性应包括原包装和工作液在试剂盒指定条件下的稳定性（试验方法见诊断试剂盒的选择）。
试剂盒的稳定性与贮存条件密切相关，工作液的稳定性还和使用中污染与否有关，在评估时，须保持指定贮存条件并要严防污染。
其他还需做准确度试验、精密度试验和抗干扰试验，具体做法请参照方法学评价一章相关内容和本章试剂盒的性能指标。

四、试剂盒性能检测的要求
进 行上述各项性能指标检测时，要求操作正规，使用的容器均经过校准，自动分析仪或分光光度计的波长、灵敏度、稳定性均符合要求，温度准确、蒸馏水合格，标准 参考物含量或定值血清的靶值均经验证。因为测定值是否准确可靠，除与试剂有关外，上述这些条件都是影响因素，如果上述因素控制不好，试剂盒质量好，测定的结果也会出现较大误差。因此，在分析试剂盒性能检测结果时，要全面分析，排除了试剂盒以外的影响因素之后，才能说明是试剂盒本身的影响，切不可简单从事。 当然，用公认的高质量同种试剂盒做对照，同样条件下与被检试剂盒同时测定相同样品，比较两种试剂盒测定结果的差异，有利于区别上述因素的影响

这内容怎么看不到啊？

楼上的电脑有问题吧？

这下能看见了。

学术性很强，实用性不足。