[推荐]五分类血细胞分析仪简介

五分类血细胞分析仪简介[

1．Bayer－Technicon的H系列 Technicon公司的血液分析仪，是用光散射原理进行血细胞分析的代表。其H系列是较早实现五项分类的分析仪之一。该仪器在许多方面与现代的流式细胞仪非常相似，即利用光散射的原理计数血细胞。因细胞表面结构不同，在不同角度上散射光有差别，有助于对白细胞的区分。此外很重要的一点是，该仪器在稀释液中加入髓过氧化物酶（MPO）的底物——过氧化氢和色原，可使含MPO的细胞浆呈现深色沉淀，可用比色法加以区分。因为中性细胞MPO为强阳性，嗜酸性细胞阳性更强，单核细胞为弱阳性，淋巴细胞阴性，嗜碱性细胞亦为阴性，故综合光散射和细胞化学染色的特点，在电脑显示屏上可得到类似流式细胞仪的二维或三维图像——不同颜色的散点图，并可打出分类结果。该仪器有四个通道，即血红蛋白（用改良的氰化高铁血红蛋白比色法）；MPO、红细胞／血小板和一个嗜碱性／核叶通道。后者是用一种PH值低的表面活性剂溶液，将嗜中性、嗜酸性、淋巴和单核细胞的胞膜溶去，剩下裸核；嗜碱性细胞不受此低PH溶血剂的影响，保持不变。此时用激光照射，在低角度和高角度测散射强度。前者反映细胞大小，由于嗜碱细胞不溶，细胞大，散射强；后者反映细胞的核叶及大小、核叶多、核大，散射越强。在散点图上嗜中性落在右边，单核落在左边，可明显分开，并可计算PMN／MN比率，称为核叶指数。该仪器关于红细胞有两个直方图，分别显示红细胞体积及血红蛋白的浓度的分布状况；一个血小板分布的直方图。另有两个散点图，一个是白细胞大小及MPO显示的白细胞分类图；另一个是嗜碱性／核叶显示的图形。H系列有H1、H2、H3和H3RTC四种型号。H3RTC可同时计数网织红细胞，其原理是在红细胞稀释液中加入可染RNA的荧光染料，经激光照射激发后在检测器中加以计数，这是光散射式血液分析仪的优越性。其他类型的仪器自动计数网织红细胞大都采用这种方法。H系列仪器所报告的参数甚多，其中如HDW和HCMC实用价值不大，其他仪器多不采用。此外，如果用特异的抗淋巴细胞亚群的单克隆抗体来处理血液，也可以检测和计数淋巴细胞亚群，其作用与流式细胞仪就没有什么区别了。不过通常不是用荧光标记抗体，而是用过氧化物酶标记，用上述显示MPO的底物显色。 2．Coulter公司的STKS、MXAM和Gen.s型 Coulter公司是阻抗法计数血细胞的首创者，也是按细胞大小进行白细胞二项或三项过筛分类的首创者（在其S系列即已开始）。为了能进行五项分类，该公司采用了与Technicon的H系列不同的设计路线，这就是所谓“VCS”技术。现分述于下。 V：代表体积，即Coulter发明的点阻抗原理，用于计数血细胞和测两其体积大小。 C：代表传导性，指一束电磁波传透过细胞的传导性，它取决于细胞大小及内部结构；经过校正后的传导性叫opacity（不透明性），不再反映细胞的大小，主要反映其内部结构，如核的大小、核及浆的密度及核／浆比等。 S：代表散射，指在不同角度测得的散射光强度。细胞表面的结构及颗粒不同，对光的散射也各异，这在上述Technicon的H系列介绍中已提到。 Coulter公司设计在单一通道上同时用这三种方法对同一白细胞进行测量，避免了有些血液分析仪要设计好几个通道或加染色试剂的麻烦。很显然，有些细胞，如嗜中性与嗜酸性细胞，若单用一两种方法（如体积加散射）结果十分相似，其二维散点图上有相当大的重叠。用了VCS技术后，一般在三个方面完全一致的情况是很少见的。加上仪器配备了先进软件，可以像流式细胞仪一样调校、设置门限，可在三维图像上将各细胞较好的分开，达到较准确的分类。减少flag的假阳性和假阴性，减少复检率，并可提示幼稚白细胞、异型淋巴细胞等。 VCS技术在Coulter公司的STKS、MAXM以及Gen.s上均已成功的应用。MAXM和Gen.s型均可计数网织红细胞。Gen.s型并可选配自动制血片机。关于Gen.s型还有不少创新，特别是在电脑方面有很多重大改进，如加了多媒体电脑和三维图像等。此外这类仪器还可直接计数CD4和CD8淋巴细胞，并算出其比率。其原理是：将包被了抗CD4和CD8单克隆抗体的聚苯乙烯微球，加到血中。含有相应表面标志（抗原）的淋巴细胞会结合相应的微球，从而改变了该细胞的VCS性质，即可在STKS等型号后的分析仪上加以测定。 3．东亚公司的NE系列、SE9000和SF3000 东亚公司是全球最大的血液分析仪专业生产厂家之一。其F系列的800型，K系列的1000型、4500型等已为我国很多血液实验室所熟悉；其五分类的NE1500型已在我国少数实验室应用，SE9000型亦已开始引进。先就其最先进的、具有代表性的五分类仪器SE9000、SF3000型作简单介绍。 原理：SE9000和NE1500、8000一样，是基于经典的阻抗（有的称之为直流电）和射频（RF相当于Coulter公司的高频传导性）两者结合的原理，同时也采用了类似TechniconH系列的特殊试剂用以区分嗜酸性与嗜碱性细胞。该仪器用于白细胞分类的有四个通道，分别是用DC技术计数WBC总数；用DC与RF技术结合，区分淋巴、单核和粒细胞，并分别在荧光屏上显示不同的色彩；嗜酸和嗜碱各为一个单独通道，粒细胞减去嗜酸和嗜碱性等于嗜中性细胞。该仪器将流式细胞仪上采用的液流聚焦技术用于红细胞、血小板及白细胞分类，以保证这些细胞一个一个有序的通过小孔，大大提高了精密度和准确性。这种技术目前已为其他一些先进的血液分析仪所采用。此外，为了防止氰化物污染，东亚公司自K系列以后，均用不含氰的溶血剂——SDS溶血试剂。 SE9000型亦配备较先进的软件，以提高对不同细胞的分辨力。例如，荧屏上有两个散点图—－DIFF（白细胞分类）和IMI（幼稚细胞信息）。在IMI散点图上，异型淋巴细胞和有核红细胞也与一般白细胞有区别。该仪器可显示及打印四个直方图、两个散点图，一个报告表以及FLAG信息等。 将上述SE9000和该公司研制的SP100自动制片染色机以及R3000／2000 网织红细胞计数仪组合起来，加上一个电脑工作站，构成一套该公司称为HST的系列，即可形成全部血细胞分析自当化系统。 4．Abbott公司的Cell－Dyn3000和3500 Abbott公司的Cell－Dyn3000和3500型血液分析仪是一种结构相对简单的五项分类仪器。其基本原理是阻抗式加激光反射。所不同的是激光是偏振光，其测散射光的角度达四个，即0°，10°，90°，90°去偏振，该公司称之为多角度偏振散射测定。因为细胞大小、折射指数、核形、核浆比率，以及颗粒性质等，均可影响在不同角度测得的散射光量。特别是该仪器采用了其他仪器少采用的10°窄角和偏振加去偏振检测法，提高了分辨力。其第一步是中性／单核细胞用0°～90°角的散射数据，再测90°～90°D的衍射差，用以区分嗜酸性与中性；而嗜碱性、淋巴及单核细胞，则按其大小和内部结构的复杂性不同，所产生的散射光，可用调校的门限加以分开。和其他三类仪器一样，所有原始数据，借助先进的电脑软件处理，在屏幕上显示6个散点图和2个直方图。为了解决新生儿红细胞往往对溶血剂抵抗的问题，该仪器还设计了一种新的专用试剂，这是该仪器所特有。 ----------------------------------------------