几乎所有的染色法机器都采用WBC/BASO通道和DIFF通道。
BASO由于其嗜碱特性,所以利用试剂的作用很容易使其从其它白细胞中区分开。大致原理是利用试剂作用标本,溶解红细胞血小板等,并使其他的白细胞穿孔褶皱,胞浆流失,而BASO保持原形态不变甚至还变得更大,这样无论采用电阻法还是光学法,都很容易的得出两群体积完全不同的细胞,由此来区别出BASO,由于其余的白细胞仅仅是穿孔,并没有溶解,所以数量也很容易计数出来。这个技术就是所谓的差别溶解技术。
有的机器设计成WBC总数是与HGB一个通道,这就相当于一个三分类的设计了,然后BASO单独一个通道,DIFF单独一个通道。三个通道都能出来白细胞总数,并且相互之间平衡比对。
DIFF通道就是除了BASO以外的其他白细胞计数,一般采用染色方法,利用试剂溶解红细胞血小板,并对所有的白细胞进行染色,染色方法有通用染色和核酸染色,过氧化酶染色等等方法,都是在一定的时间内让细胞着色,并利用缓冲液终止染色,而且还要洗掉多余的染料,这样再进行光学计数。得出来包含BASO在内的所有白细胞数值,这种方法得到的BASO很难与单核群、中性群、和嗜酸群明确的区分,所以要从WBC/BASO通道得到的BASO数值进行减法计算。这种方法也对所有的白细胞进行数值计算,所以也得到一个白细胞总数。
DIFF通道与WBC/BASO通道的白细胞总数相互比对,误差在一定范围内,报告WBC/BASO通道数值,误差超过一定范围,则报告计数错误或者给予提示,DIFF+/-,或者LMNE+/-等。
染色根据设计方法的不同,可以同一种试剂完成溶血、染色然后再加入第二种试剂(一般是稀释液)进行缓冲和洗染,这样的方法目前来看速度偏慢。也有采用多种试剂,先溶解再染色然后再缓冲(什么不缓冲不洗染)。
|