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树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗(简称DC疫苗)是当今研究最活跃、成果最大的生物治疗课题。
树突状细胞是已知体内功能最强、惟一能活化静息T细胞的专职抗原提呈细胞,是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。围绕DC建立的旨在增强机体特异性抗肿瘤免疫能力的一系列策略,已成为肿瘤生物治疗的重要课题。目前,活化的树突状细胞已经成为某些肿瘤的有效治疗手段之一,也成为其它多种疾病包括感染性疾病、自身免疫性疾病和移植排斥等治疗的希望所在。以肿瘤细胞为基础的树突状细胞(DC)疫苗主要有:肿瘤细胞抗原肽DC疫苗、肿瘤细胞溶解物DC疫苗、凋亡的肿瘤细胞DC疫苗和肿瘤细胞与DC融合的杂交疫苗.这些DC疫苗为肿瘤的免疫治疗增添了新内容,并在部分恶性肿瘤的治疗中取得了令人振奋的效果,显示出了DC疫苗在恶性肿瘤等疾病治疗中的巨大前景。
标本采集: 1、标本采集是在手术当天,准备两个50ml离心管,一个盛血液一个盛放标本。分别标记,并在盛血液的离心管内放10ml无菌肝素工作液,装标本的离心管可不加任何溶液。取术中的切除组织,置于空离心管内,并加生理盐水。采集外周血液20ml,将血液缓缓注入有肝素溶液的离心管内,盖紧盖子,摇匀,防止凝血。所有标本都放置于低温。 2、以后只采集外周血液即可,要求同前。 血液的处理: 1、所有操作戴手套进行。 2、用物的准备:直头吸管、小吸管、大吸管各一管,离心管15ml 11个,50ml离心管1个、25cm2、75cm2各一个、 20ml注射器1个、冻存管2支,PBS液、含10??fbs的1640液、密度1.073的percoll液(percoll液是一种对细胞毒性小的密度分离液,原理就是通过一定速度和时间的离心后将密度较大的细胞沉底,密度较小的细胞漂浮在它表层)、20ml注射器1个、将超净台充分消毒,檫拭台面,准备好酒精灯、污物缸、吸耳等。
美国阿肯色州医科大学妇科肿瘤学系Santin等将HPV16及18的E7蛋白负载到自体树突状细胞(DC)制备治疗性细胞疫苗,用于常规治疗难以控制的复发性或转移性宫颈癌患者,发现这种自体DC可以刺激常规治疗无效患者的全身性B细胞及T细胞增殖反应。鉴于以往治疗造成的免疫抑制具有限制主动性免疫治疗的作用,因此,以DC为基础的疫苗试验可用于临床期别较早和(或)肿瘤负荷小、具有免疫活性的宫颈癌患者,但存在造成肿瘤复发和进展的风险。
日前从中山大学肿瘤医院获悉,该院研发出一种白血病DC疫苗,可以激活病人抗白血病免疫系统,杀死体内白血病细胞。这一方法目前已经在14位患者身上获得明显疗效,国内尚属首创。
目前DC疫苗是个热点,国内外都在研究探索,你的DC疫苗如何做的?是否有效,必须设立严格对照。 举个例子:体外杀伤实验时效应细胞分无DC刺激组(A0组)、多种细胞因子培养的DC刺激组(A1组)、多种细胞因子和TAA培养的DC刺激组(A2组).体内实验时,裸鼠分肝癌BEL7402和胰腺癌PC3两大组,每一大组分三组:阴性对照组(Ⅰ)给等量的1640培养液;预防组(Ⅱ),于接种BEL7402或PC3前1~2 d给免疫效应细胞;治疗组(Ⅲ),待全部裸鼠移植瘤长出时给免疫效应细胞;组Ⅱ、Ⅲ于给予免疫效应细胞后再间断给予DC培养上清液.结果体外实验中,计算DC诱导免疫效应细胞对BEL7402的最大杀伤效率,对PC3的最大杀伤效率.体内实验中,计算两大组中的组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ成瘤率,于移植瘤产生后的第45天处死所有裸鼠并称瘤体的重量,比较肝癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ两两比较有无意义(P<0.01).胰腺癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有无显著性意义。
以上仅供参考,祝实验顺利。
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