[转帖]时间分辨荧光免疫

第一部份：时间分辨的原理、我国乙肝两对半的流行情况及时间分辨在乙肝两 对半上 的应用技术

一、时间分辨荧光分析（ Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA ）的基本原理。

　　TRFIA 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物，如 铕 （ Eu3+ ）、 铽 （ Te3+ ）及钐（ Sm3+ ）、 镝 （ De3+ ）等代替传统的荧光物质、放射性同位素、酶和化学发光物质，来标记抗体、抗原、多肽、激素、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系（如抗原抗体免疫反应、生物素（链）亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等）发生后，用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。

运用稀土离子及其螯合剂作为标记物，被激发的荧光有以下特点：

1、与普通的荧光比较，稀土离子螯合物荧光的衰变时间长，为传统荧光的 103 ～ 106 倍。从而可以通过延缓测量时间，让短寿命荧光衰变掉后，再测量目标样品，这样可以最大限度地克服来自样品、试剂的自然本底短寿命荧光（通常为 120nS ）及散射光的干扰，大大提高检测的灵敏度。

2、激发光与发射光的 Stokes 位移大，可以达到 200 多 nm ，而普通荧光物质的 Stokes 位移最多也只有几十纳米。这表明，在某一波长测定样品荧光时，可以通过非常简单的方法（如使用滤波片或分光计），就可消除激发光和散射光的干扰；同时，被激发的荧光光带极窄，荧光的发射 峰非常 尖锐，可使仪器调整在极窄的波长范围内测定，极大地降低了来自背景的各种干扰。

3、标记物为原子标记，体积很小，标记后不会影响被标记物的空间立体结构，这既保证了被检物质的稳定性（尤其对蛋白质影响更小），又可实现多位点标记。标记物稳定，就可以对标记物进行多次激发，通过对每次激发的荧光信号累加后（如激发测量 1000 次）取平均值的办法，可以大大减少偶然误差的产生，提高检测的准确度；同时多位点标记技术，不仅使检测更灵敏，也可使用双标记技术使一个试剂盒能够同时检测出两种或两种以上的项目。

　　TRFIA 技术集酶标记、同位素标记技术的优点于一身，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、标记物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽和应用范围广泛等优点，成为继放射免疫分析之后，标记免疫分析法发展的一个新的里程碑，被称之为 " 零本底 " 的检测方法。其灵敏度大大地超过了放射性同位素（如表 1 所示），是目前配基结合分析中最有发展前途的一项 生化超 微量检测手段，非常适用于生物学、医学上的超微量分析。

学了，谢谢。

学习

谢谢楼主分享

学习

认真学习

学习，谢谢！

谢谢分享，学习

学习一下，谢谢。

还有吗？？

真长知识，谢谢