哎,09年6月份的帖子,到现在也没有一个正面回答问题的!
我来试着回答一下吧!看看是否是你想要的回答。
半自动生化设置有几个关键的参数,只要这几个参数设置正确了,基本没有什么问题。
这些参数一般在试剂说明书里面可以找到。
1,测试方法:生化里面测试方法总的分为三种,终点法,速率法,两点法,三种方法原理和区分我就不解释了;
2,测试波长:测试波长分为主波长和次波长,半自动生化一般只用到主波长,每个测试项目的测试波长都不一样,在试剂说明书里面找吧!
3,测试温度:生化测试温度一般分为25度,30度和37度,当然,绝大部分都是用37度;
4,因子(速率法):对速率法来说,在试剂说明书上会给出一个理论因子,只需要把理论因子输入仪器,即可测试,而不需要定标;(注意,理论因子针对不同的仪器可能有区别,在不同的温度下也有区别)
5,孵育时间:是指样本与试剂混合后,在一定温度下反应的时间,终点法项目一般在水浴箱中孵育,速率法和两点法一般在比色池温育更精确;
6,读数时间:是指样本与试剂反应后,在比色池里面开始测试的时间,速率法一般60s即可,终点法一般1s即可;
7,标准浓度:标准浓度是标准品的浓度,主要有单点定标,多点定标,定标的目的是为了得到计算因子,首次测试的时候要求先定标计算出因子;
8,吸液量:吸液量是仪器测试时要求的最小进液量,为了保证测试液体能进入比色池,不进入气泡,一般要保证在比色池两端有一定长度的液体,吸液量跟每台仪器有关,一般450uL即可;
以上8个参数只要设置正确,仪器设置方面即完成。
下面说一下操作的过程;
先介绍几个概念:
水空白:即在一定温度和波长下,测试蒸馏水的ABS值,测试时,直接拿蒸馏水吸入比色池测试;
试剂空白:即测试试剂不加样本,在一定波长下,直接把试剂吸入比色池,测试试剂的ABS值;
样本空白:一般只有双试剂以上才有样本空白的概念,是指试剂R1+样本,吸入比色池测量ABS值,做为空白对照;样本空白是为了消除样本的干扰;
标准测试:有兰博-比尔定律,C=K*A,用仪器检测已经浓度的标本,测试标本的ABS值,计算出常数因子K;标准测试的目的就是得到因子;
举个例子说明操作步骤:
比如要测试样本的ALT,查看试剂说明书,ALT是液体单试剂,样本和试剂比例关系是1:9
此时先注意仪器的最少吸液量是450uL,那么我们在加试剂和样本的时候,注意让总液量要超过450uL;
因此,我们吸50uL的样本血清加入试管,然后加入450uL的ALT试剂,沿试管壁加入试管,混匀,立刻吸入比色池进行比色,测试完成。
以上说的是液体单试剂,如果是粉末试剂,或者粉末双试剂,那么就需要在开始测试前,溶解和混合好试剂,才开始测试。
比如,有一个项目有两个试剂,R1和R2,配合比例是1:2 ,样本:R1:R2=1:3:6
那么,先把R1和R2按1:2的比例混合(量的多少根据你测试的样本数决定,不要浪费),在这里我们取测试一个样本的量,吸200uLR1,吸400uLR2,混合成总量为600uL的混合试剂;然后,根据 样本:R1:R2=1:3:6 ,我们可以推算出,样本与混合试剂的比例关系,即样本:混合试剂=1:9(3+6),这样,我们在试管中加入50uL的样本血清,然后加入450uL的混合试剂,沿试管壁加入试管,混匀,孵育完成,吸入仪器,测试。
以上是简单的仪器设置和测试操作的介绍。
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