我可能对楼主的ABS limit理解有误,楼主的概念可能是反应中的ABS limit,那么其意义就如同我下面所说的第二点。在这里不想就ABS limit到底是什么来谈,就想说仪器是如何保证速率法结果准确的。以下以日本仪器,ALT试剂来谈。
1. 首先,仪器有S1ABS limit,在这里的设置是为了保证试剂的线性高值能达到要求说设的。具体可参照我9楼的内容。
2. 然后,仪器有 ABS limit设置,这是对反应曲线的观察,这个设置是对试剂的经验指数,比如ALT,一般吸光度降到4000-6000后就很难保证反应成线性了,因此一般就将ABS limit设置为4000-6000,当反应的点低于此点后仪器就会报警。
3. 最后,仪器有线性判断,对检测点间的线性进行判断,可以发现是否有跳点,或者底物耗尽等,当然此线性判断的标准是不高的。实际在反应中,虽然是零级反应,但由于试剂反应体系、仪器的误差,每个检测点间隔值并不是一样的,有时差别还不小。到后期时会越来越小。研发人员一般都是参照实际检测结果来调整试剂原料量。
通过这三点,仪器基本就能保证速率法试剂检测结果的正确性,除试剂本身有问题除外。
在9楼时我说低于1.0A也可用,是基于省钱的目的,因为根据前面说述第2、3点,对于高值如果底物耗尽自然会报警的,现在有的仪器都允许用户检测后调整检测点,都是为了方便用户。当然同时能保证第一点就更好了。
至于10楼所说的低于1.0就是底物浓度过低,在酶类反应过程中当底物浓度过低时反应速度不再与酶活性成正比,造成线性段缩短,线性限降低。后半段正确,前半段不能说对错,看怎么理解。我这里只是说虽然空白在1.0A以上,但检测中检测点的吸光度在1.0A以下是很常见的,当然对计算也没啥问题,还有上面的第二点来保护结果的准确。 |