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免疫球蛋白测定的王牌
---ARRAY-360测定仪
笫二军医大学长征医院全军临床免疫中心
孔宪涛
免疫球蛋白测定是用抗原抗体结合技术模式，在自动、半自动或手动仪器上完
成的，这种测定模式是利用免疫反应中的沉淀反应原理进行的。免疫沉淀反应有许多种，其中只有免疫浊度法是用于定量的，它己广泛用于各种体液蛋白的测定。免疫浊度测定与其它化学或酶学技术相比，免疫浊度法有自己的特性，不是任何自配试剂或测定仪器可以代替的。
一、免疫浊度法的特殊性：
抗原和抗体形成的复合物的量与其他化学方法不同，以NaCl和AgNO3化学反应
为例： 有AgNO3和NaC1存在，沉淀物永远增加，不存在反应物的过量。但
Ag+Ab→AgAb则不同了，Ag和Ab必须在一个恰当浓度才会出现最高结合峰。
抗原或抗体的过量存在，不但不会形成更多的复合物，相反还会引起复合物的
再溶解。这就是抗原、抗体结合的最适比例。免疫比浊试剂不掌握这个原则，试
剂将不合格。免疫比浊的基本条件是在保持抗体过剩的条件下测量加入的抗原。
二、浊度试验的最太弱点----
伪浊度：临床检验最常出现的，也是大家最关注的问题是假阳性和假阴性的判
断，这点在浊度测定中更容易出现。综合起来伪浊度的原因大约有 ：
1 抗血清中的抗体不纯； 2 增浊剂的浓度不合宜；
3 抗血清和被测物的灭活处理等；
4 其他如pH、离子强度、温度等皆可对浊度形成的影响，但没前三点更重要。
三. 免疫浊度试验对抗血清的要求
抗体的效价：
这是个较混乱的易被忽视的方面，也是免疫浊度法的最大特点。测定效价方法比
较复杂，这里不能详述。但有一个原则，应既知道抗体的效价，也应知道该抗体
效价对何种抗原浓度最适合。否则，随意定个效价，将会自欺欺人. 抗血清的亲和力：
抗血清除了要求效价之外，还必须要求亲和力，这也是免疫浊度法另一特点。效
价是指抗体的量，亲和力指抗体的质。一个合格的比浊用抗体其效价必须在
1：16 (抗体稀释度)以上，否则伪浊度太大。亲和力测定较困难，一般用平衡
法，对大分子的蛋白质抗原既不经济也不易做成。用速率峰出现的最短时间，
一般在30秒之内，越短越好，10秒左右亲和力最好。采用分光光度计最好用
动态法，如用一般分光光度计则应快速测定几个点，测定达到高峰的最长时间。
不论用什么方法， 都应先找到最佳比例，然后上机测定。
R型和H型抗体：
作为测定用的抗血清不是任何动物皆适用，有些抗血清并不适用于免疫比浊。
R型 (rabbit type,兔型 ) 抗血清系指以家兔为代表的小动物血清，如豚鼠、大白
鼠、家兔等，这种抗血清亲和力高，与抗原结合后不易再解离，抗体过剩易形
成大而稳定的复合物，但抗原过剩则会形成可溶性复合物。因此，在抗体过剩
条件下用于比浊是理想的试剂。H型 (horse type，马型 ) 抗血清系指以马为代
表的大动物，如驴、骡、马、人等，该血清的特点是亲和力弱，抗原抗体结合
后极易再解离，抗体过剩和抗原过剩皆易形成可溶性复合物。因标本中抗原含
量高低差别极大，在实际工作中很难把握两者的恰当比例。因此，H型抗体用
于比浊法是个不合适的试剂。
增浊剂的使用：
比浊法的特点是快速，尤以速率比浊法，必须在短时间内快速形成复合一促
进有结合力的抗原、抗体靠近并结合成大复合物。有人为了追求速度大量加
入PEG用量， 结果出现了伪浊度，这也是不允许的。
四. 免疫浊度法对测定仪器的要求
免疫球蛋白测定与其它血浆蛋白相比，又有其特殊的地方，这是因为免疫球蛋白
增殖量可以成倍甚至十数倍地增加测定仪器必须能识别有无抗原过剩，在一般自
动生化分析仪上是没有这种程序的。也由于此，认为用自动生化仪也能测定免疫
球蛋白的说法是错误的。
ARRAY-360专门设计了识别抗原过剩的程序，在自动测试中会自动对某个样本进
行适当再稀释，以消除假性降低，防止了差错。
总之，任何一种测定有其特定的条件和科学的设计，不能随意制定检测方法，这
是对病人负责也是对科学负责。 | 
