我实验室自1998年购进一台Sysmex CA-1500 全自动凝血分析仪,在使用的过程当中积累了一定的经验,有如下一些体会,希望与广大的凝血仪用户特别是Sysmex CA 系列凝血仪用户共同探讨。
1. Sysmex CA-1500有先进的方法学:集凝固法、发色底物法、免疫法三种方法于一体。
(1)凝固法:应用散射光比浊原理,检测血液凝固反应过程中散射光强度的变化,从而检测与血液凝固相关的凝血因子的含量。凝固法很早就应用于血凝的检测,但Sysmex CA-1500使凝固法得到了发展,即检测不同标本的基础散射光强度定为bH0%,然后分别测定50%和100%,从而绘出曲线,这样就使溶血标本和乳糜血标本的凝血项目检测成为可能,我们在临床标本的检测中也印证了Sysmex CA-1500的较强抗干扰能力。
(2)发色底物法:大部分抗凝系统的检测应用了发色底物法,我室应用发色底物检测通道批量检测过AT-III、PLG、PC、PS诸项指标,结果显示发色底物通道具有良好的线性和重复性,而且检测时间较快,标准曲线设置较简单,操作简便,适用于临床常规检测。
(3)免疫法:Sysmex CA-1500创造性地将免疫比浊法引入到凝血仪中,使许多有关血栓/止血的分子标志物的检测成为可能,特别是在D-Dimer 的常规检测方面提供了既快速又准确的定量检测方法,可以称为凝血仪的一次革命。
D-Dimer是纤溶酶水解交联纤维蛋白的产物,是具有共价键的D片段,是血栓形成的分子标志物,在DIC、DVT、PE等许多疾病的诊断和治疗当中有重要意义,也得到了临床医生的认可。D-Dimer的实验检测方法有定性和定量两类,定量检测又有ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫比浊法和半定量的读卡法。因临床诊断和治疗的需要,定量法为首选,且需要快速简便的方法,ELISA法虽准确,但不能及时检测,不适用于临床即刻检测的需要。Sysmex CA-1500采用的免疫比浊法测定D-Dimer具备了免疫法的定量和快速检测的特点,为D-Dimer的检测开辟了新天地。
CA-1500(含其他有免疫方法的CA系列凝血仪)采用的免疫比浊测定法,以碘钨灯做光源,在405nm、575 nm、800 nm处产生滤过光,其通过含有标本与胶乳试剂反应的试管时测得反应的浊度OD值,结合反应的曲线,对照标准曲线可计算出标本中抗原的浓度。在具体的检测当中,我们先后应用过biopool公司的Auto-Dimer和DADE BEHRING公司的D-Dimer PLUS 检测试剂盒,检测的精度、准确度、灵敏度逐步提高,前者试剂检测的最大值为3200ug/l,而后者可达到9500 ug/l,大大提高了检测的线性范围,而且在对高浓度抗原标本检测中,为了避免其产生的非线性反应曲线和假性低值,CA-1500通过对起点和线性范围内任一点的ΔOD/分钟的变化监测进行有效防范,如果测得值在鉴别限以上者作为抗原过剩报警(Error 8),并自动重稀释样本进行复检,这种功能在实际工作中十分重要,把由于反应线性错误造成的假阳性结果甄别出来,使结果更准确可靠,也使CA-1500的免疫比浊法更加完善。