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[转帖]免疫学检验的热点与难点

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xuesong2002 发表于 2009-12-4 22:25 | 显示全部楼层 |阅读模式

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免疫学检验的热点与难点
 

作者:武建国 李晓军 王艾丽 虞伟
作者单位:南京军区南京总医院全军医学检验中心

    免疫学检验是临床免疫学的重要组成部份。外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导机体的免疫应答,在体内产生物异性和特异性T细胞的克隆扩增和效应增强。免疫学检验的任务主要是利用抗原、协助临床医师对疾病进行诊断,其范围可参看表1。

表1免疫学检验的任务与范围

判断机体的免疫功能状态

非特异免疫功能(细胞、免疫活性物抽的数量与功能);体液免疫功能(免疫球蛋白的量与质,特异性抗体的产生);细胞免疫功能(T淋巴细胞的量与质,细胞因子)

检测抗原

病原物质(细菌、病毒、真菌、螺旋体、立克次体、衣原体、支原体等病原微生物与寄生虫的特异抗原);生理物质(各种激素、药物、血型抗原、生物活性物质等);病理性物质(肿瘤相关抗原、各种过敏原等)

检测抗体

各种病原微生物在体内诱导产生的抗体;各种自身抗体;各种过敏原诱导的抗体;血型物质抗体等。

    目前,免疫学检验大致分为常规诊断用和研究用项目。本文主要就常规诊断用项目进行探讨。

    1、免疫学检验对临床的诊断价值

    依对临床的诊断价值,免疫学检验可分为有诊断意义的、有相对诊断意义的和无诊断意义的三类。

    1.1意义的

    1.1.1对免疫缺陷病 免疫球蛋白、IgG亚类、补体、T细胞、B细胞、NK细胞、1.1.1对细胞亚类(CD3+、CD4+、CD8+细胞)丝裂原促淋巴细胞增殖反应、细胞因子与受体、中性粒细胞与单核细胞(趋化、吞噬、杀菌功能)等。

    1.1.2对免疫增殖病 淋巴细胞表型(区分淋巴细胞白血病、淋巴瘤为何种细胞类型)、M蛋白、本周(Bence-Jones)蛋白、浆细胞计数等。

    1.1.3对传染病 各种致病性细菌、病毒、真菌、螺旋体、衣原体、支原体、立克次体、埃立克体、prion、寄生虫等的抗原和/或抗体。

    1.1.4对变态反应病 各种变应原特异性IgE。

    1.2有相对诊断意义的

    1.2.1肿瘤 肿瘤标志物。

    1.2.2自身免疫病 各种自身抗体;自身抗原诱导的淋巴细胞增殖反应。

    1.2.3其他 如AIDS时测定CD4+细胞、CD4+/CD8+比值;前炎症介质、急性期反应蛋白等。

    1.3无肯定的诊断意义的 包括一般疾病是的免疫球蛋白定量、补体测定、免疫复合物测定、细胞因子及其可溶性受体测定、T细胞亚群测定等。

    2、当前免疫学检验的优点

    所指热点,是当前研究较多并对临床较有诊断价值的项目。

    2.1传染病相关的项目 新出现的传染病(emerging infectious diseases, EID)即近年来确认的由新种或新型病原微生物引发的传染病。其中有些已有较成熟的免疫学检验方法,有些则仍在研究中。例如:AIDS、丙肝等感染病例甚众,免疫学检验已有定型方法,但仍在不断完善中;输血传肝炎病毒(transfusion transimitted virus, TTV)所致肝炎、埃立克体病(Ehrlichiosis)、传染性亚急性海绵状脑病(prion引起)、细小病毒B19所致感染、军团菌病等则尚无满意的免疫学检验方法。

2.2肿瘤 肿瘤标志物的常用免疫学检验项目有30余种,在某些肿瘤的早期诊断、筛查和肿瘤的辅助诊断、疗效观察、预后判断方面有重要价值。端粒酶(telomerase)是一种核糖核酸蛋白酶,可使染色体末端的端粒(telomere)恢复功能。目前认为,端粒酶的活化与肿瘤的发生相关。

    2.3自身免疫病 是一组由自身免疫反应参与发病机制的疾病。自身抗体、自身抗体与游离抗原形成的抗原抗体复合物以及致敏T细胞可对自身组织造成损伤。目前临床常用的自身抗体检查项目有三、四十种,对某些自身免疫病起标志抗体作用。免疫复合物与致敏T细胞的检查尚未广泛开展。

    2.4全身性炎症反应免疫标志物1991年提出全身性炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)新概念。SIRS多因严重感染、常伴有弥漫性血管内凝血(DIC)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官功能不全综合征(MODS)等,发生机制与炎性细胞因子大量释放有关。为防止病病发展成SIRS,目前主张监测前炎症介质(TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8)和急性期反应蛋白(APP),后者中则以C反应蛋白(CRP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)最为重要。

    2.5淋巴细胞免疫表型分类 在淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤的免疫学分型上有重要价值,有助于指导治疗和判断预后;可大致有了解T、B、NK及辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞的数量,从而判断细胞史疫功能状态。

    2.6 TH1、TH2极化(polarized)群体分析 目前认为,TH1和TH2细胞可能不是亚型(subsets)而是机体在特定抗原刺激并诱发产生细胞因子的条件下,TH细胞发生极化(polarization)的结果。这种极化具有可塑性,受抗原刺激,TCR与MHCⅡ类分子和抗原肽相互作用的亲和力、共刺激信号、细胞因子和活化诱导的细胞死亡(AICD)等调控。TH1型细胞因子(INF-γ、IL-2、TNF-β)介导细胞免疫(DTH)、CTL分化与激活、巨噬细胞活化,抑制B细胞。TH2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)促进B细胞分化与激活,介导体液免疫反应,是IgG和IgE类抗体生成的转换因子。TH1和TH2型细胞因子的平衡,是机体处于正常状态的保证。二者失衡,是感染、自身免疫病、变态反应、器官移植排斥反应、肿瘤的发生与恶化的重要促发因素。

    2.7细胞凋亡 细胞凋亡(apoptosis)是细胞生命周期中的重要组成部分,它的发生受多种因素(激素、细胞因子、药物、物理因素……等)影响,也受细胞内诱导调亡基因(p53、ced-3、ced-4、c-cyc、fas/apo-1……等)、抑制凋亡基因(bcl-2、ced-9、v-raf……等)调控。细胞凋亡的增加和减少与某些疾病(AIDS、再障、Alzheimers病、缺血性心脑血管病等及肿瘤、自身免疫病、某些病毒感染)的发生、发展相关。目前成为研究热点,但尚未达到临床诊断的应用阶段。

    3、当前免疫学检验的难点

    3.1试剂盒的品质与规范 免疫学检验的试剂盒品质参差不齐,亟待规范。以某种试剂盒为例,8个厂家的试剂盒分别检测各试剂盒的阳性标准品,结果差异甚大。见表2.对一组标本检测技术结果,阳性例数分别为4、2、1、3、0、0、0、3例。

表2 8个厂家的试剂盒对8种阳性标准测定的结果

阳性标准号

试剂盒号

1

2

3

4

5

6

7

8

1

2

3

4

5

6

7

8

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*吸光度(A)<0.5

3.2检测方法本身的素质 免疫学检验方法是否优点。受制于很多因素,如所用抗原的纯度、特异性,所用第一抗体、第二抗体的效价、特异性、亲和力,所测靶物质在体内的含量及疾病特异性等,常用ROC(receiver operating characteristic)曲线来进行考核,即以敏感性和特性作图分析。目前,很多免疫学试验如肿瘤标志物、自身抗体的测定等都达不到理想的要求。

3.3试剂盒与仪器的价格 很多试剂盒与仪器均依赖进口,价格高昂,受国情限制。 产医疗仪器在质量和售后服务上还有待改进。

    3.4检测指标本身的意义难以确定

    3.4.1淋巴细胞表型分型 例如T细胞亚群测定是用单抗分析细胞膜上CD抗原。但有CD2表型的不仅T细胞,尚有NK细胞;CD3阳性的有T细胞和胸腺细胞;CD4阳性的除T细胞亚群(TH)外还有单核细胞和胸腺细胞亚群;CD8阳性者除T细胞亚群(Tc/Ts)外还有NK细胞亚群、胸腺细胞和上皮内淋巴细胞(IEL)。

    3.4.2 TH1型细胞因子和TH2型细胞因子 分泌TH1/ TH2型细胞因子的细胞并不局限于TH1、TH2细胞。见表3.

表3 TH1/ TH2型细胞因子的产生细胞

细胞

TH1型细胞因子

TH2型细胞因子

TH0

TH1

TH2

Tc1

Tc2

NK

肥大细胞

B细胞

巨噬细胞

IL-2,IFN-γ,TNF-β

IL-2,IFN-γ,TNF-β

_

IL-2,IFN-γ,TNF-β

_

IFN-γ

_

_

_

IL-4、5、6、9、10

_

IL-4、5、6、9、10、13

_

IL-4、5、6、9、10

_

IL-4、IL-10

IL-4、IL-10

IL-6、IL-10


                                                       摘自《临床检验杂志》


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