[转帖]标本前处理对生化检测的影响

标本前处理对生化检测的影响

赵来，鲍淑银，董宇

作者单位：068150河北省隆化县医院(赵来、董宇)；068150河北省隆化县中医院(鲍淑银)

f关键词】标本前处理；生化检测
【中图分类号】R 392．6【文献标识码】B【文章编号】1674—3296(2010)02—0124—02

随着全自动生化分析仪在临床检验中的广泛应用，检测速度大幅提高，标本上机后平均每个项目所需时间为4min左右，而从采集血液到分离出血清至少用30min，有的需要lh，提取血清或血浆已经成为制约检验速度的瓶颈，为此不少单位采取各种方法试图缩短标本处理时间，然而不当的处理方式会对标本产生“硬伤害”，对结果的准确性和可靠性造成影响，本文就这方面内容阐述如下。
1抗凝剂的应用
抗凝全血分离血浆快，大大减少自动化分析仪堵针现象，目前成为标本处理的首选方法，其中以肝素应用为多。但不少学者研究发现，并非所有生化检测项目都适合单纯抗凝处理，应当根据所测具体项目分别对待。实验证明肝素抗凝血浆对少部分项目可产生较为明显的影响，如对乳酸脱氢酶(LDH)，离子钙形成负干扰?；对白蛋白(Alb)，酶法测定肌酐结果产生正干扰旧J。专用采血真空管收集的标本小能兼用，如EDTAK2、枸橼酸钠抗凝血浆不能用于淀粉酶和碱性磷酸酶(ALP)检测(导致结果降低)，测阻糖用氟化钠(NaF)抗凝血浆会影响尿素测定(NaF抑制脲酶)，而肝素D．甘露糖氟化钠(NaF)抗凝制作的血标本，除肌酸激酶(CK)、钠离子(Na+)外，对其他大部分生化项目影响较小，这一现象有别于上述结果，是否符合抗凝剂组成成分的不同产生的效果不一尚待进一步论证，特别是在对照研究时标本选取要有代表性，样本数量要足够，以充分说明问题。
2促凝分离胶
血清分离胶主要是由硅橡胶、大分子碳氢化合物、疏水胶等组成。真空管内壁所涂促凝剂可促进血液加速凝固，室温放基金项目：承德市科委2008年科技支撑计划项目置15min可使血标本彻底凝同，分离的血清清澈，无混杂物。
当前已成为具有推广前景的血标本处理介质，临床应用特别是急诊生化检验显示出独特的优势。文献报道速凝管与普通真空采血管标本各项生化结果差异均无统计学意义HJ，用分离胶促凝管分离的血清生化指标稳定性又优于普通促凝管，前者更适于存储血液标本。值得注意的是，目前市场上的促凝分离胶采血管质量不等，临床实验室必须对其进行各项生化指标的对比实验，只有通过实验评价才能应用于临床检验。

3标本储存温度
不同的生化指标在不同的温度环境下稳定性也有差别，为加快血液凝固和血清析出通常将血液标本放于37℃水浴箱中温浴，其实这样处理将会导致CK活性降低，面血清酸性磷酸酶(ACP)即使在室温下 1—2h其活力也会降低50％。因此如果不能立即检测，应将血清放于40℃或冰冻保存，标本也可以加入醋酸酸化处理。血清离体后ALP室温(25℃)下活性会轻度升高，即使储放于4℃冰箱中也会出现缓慢上升，冰冻时反而使ALP活性降低；另一方面，研究表明冷冻保存的临床标本和质控品解冻后应充分混匀，否则能导致质控失控。LDH只能存放于室温下，与室温组(23～25℃)对比研究发现，温育组(37℃)血清LDH活性显著升高(P<0。01)Hj，标本置于4℃时LDH反而不稳定，一20℃下过夜LDH。、LDH，将丧失全部活性。如果血清必须存放较长时间，应加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)10mg／ml或谷胱甘肽3．1 me,／ml后保存于4℃环境中
以降低LD4、LD，的失活速率。测定电解质用的标本不能及时分离血清要放于室温或37℃水浴箱内，绝对不能置放入4℃冰箱里以免溶血发生；而血清脂肪酶样本实验前应放于4℃以下，并避免反复冻融；炎热季节采集血氨的抗凝静脉血应密封置冰水中降温以减慢脱氨作用，同时尽快分离血浆检测。
4存储时间
由于时间等原因，个别标本不能做到及时检测，有的为了复查之用，检验后的标本都应加盖密封保存。标本存储时间一般和环境温度相关，除K+、Na+、Cl一和个别酶学及血糖检测项目需要及时检测外，其他项目标本应尽快分离血清并在4℃冰箱中密封保存24h。室温存放的标本引起结果偏高的是：肝功能总蛋白(TP)、ALB、总月且同醇标准值(CHO)、K+、Na+、天冬氮酸转氨酶(AST)、ALP、谷氨酰基转移酶(GGT)；引起结果偏低的有：葡萄糖(GLU)、血清总胆红素(TBiL)、CI一、ALT；血液标本放置时间对结果影响差异无统计学意义的是：DBiL、三酰甘油(TG)一J。另外实验表明，敞L1塑料试管血浆组的测定值与有盖真空采血管组结果比较有差异有统计学意义(P<0。05或P<0．Oi，其Na+、cl一、尿素氮(BUN)、TG明显升高；GLU、血清总二氧化碳(Tco：)、TBiL明显降低，血清组GLU、TBiL值下降，差异均有统计学意义(P<0．05)。不同时间段比较发现，暴露的标本K+、Na+、CI一、Tco，、GLU、pH，存放30min检测结果与0min无差别；60rain、120min和180min时检测结果与0min比较，K+、Na+、CI一明显增高(P<0．05或P<0．01)。
并且随着存放时间延长出现逐渐增高的趋势，而Tco：、GLU和pH明显降低(P<O．05或P<0．01)，随存放时间的延长有逐渐降低的倾向。密闭保存的血浆标本的K+、Na+、C1一、Tco：、GLU和pH，在不同存放时间的检测结果差异无统计学意义(P>0．05)¨?。测高血脂血清铁时，血清加入试剂后放置15min再测定较好。
5离心处理
一般建议最大离心速度为4000rpm，血浆标本离心时间为10min，血清标本5min为宜。分离血清或血浆启动离心机时应逐渐加速，骤然将速度调至最大，容易造成标本溶血，使心肌酶结果明显升高，血糖结果明显降低。因此在血块完全收缩后自然析出血清时离心处理为佳。实验发现将分离的血清吸取到小杯子中再次离心会有80％的标本有少量红细胞沉淀，说明转移血清时会携带红细胞污染，需要二次离心以减少红细胞对测定的干扰?。而有学者认为对整体血标本重复离心会对多项生化指标产生影响，其中TG、脂多糖(LPS)、尿酸(UA)、锌(Zn)、镁(Mg)、AST经过不同次数的离心处理后检验结果差异有统计学意义，提示标本的前处理应尽量避免重复离心，以保证临床检验结果的准确性¨¨；另一方面离心速度太小，离心时间较短血浆中仍会残留少量红细胞和血小板，而红细胞和血小板内富含LDH、K等物质，在低渗试剂环境中细胞溶解，导致
LDH、K等检测值增加；对于严重脂浊血，有条件的单位可采用。高速离心法消除脂浊对生化检测结果的影响有一定效果。
6稀释标本
高浓度标本往往超过试剂检测线性范围，一般试剂厂商建议用生理盐水稀释，测定结果再乘以稀释倍数即可，而自动生化分析仪多用试剂来完成；但有的特殊项目如糖化血红蛋白标本则必须用蒸馏水稀释；有时稀释标本为的是减少血清的影响，如测定高密度脂蛋白胆固醇时沉淀后的上清液必须清晰，浑浊严重的标本导致沉淀不完全，上清液稍浑时。可用生理盐水稀释重测。ALP活性与血清在反应液中所占体积分数有关，稀释度<l：50时酶活性降低。中生北控胆碱酯酶试剂在37℃测定时要将样品先用生理盐水稀释一倍，但注意测定结果无需乘2。目前许多自动生化分析仪多采用厂家提供的小牛血清作稀释液，但成本昂贵。有学者研究发现AST、CK、LDH用蒸馏水稀释。CK—MB用生理盐水稀释标本既经济又不影响检测结果。
7避光
需要避光的项目较少，但其影响却不可忽视，如光照对CK活性有抑制作用并促进胆红素氧化分解。不能立即检测的样本应贮存于暗处，血样置于生化分析仪样本盘后立即放下仪器顶盖以遮挡日光照射。
8其他方式
消除高脂血对生化检验结果的干扰，可采用超滤净化法清除血脂；溶血标本，可将血红蛋白抗体与聚苯乙烯结合，再加入到高血红蛋白血清中，使抗原抗体发生特异性免疫反应形成沉淀，经离心可将血红蛋白分离掉¨“，这2种方法虽然效果较好，但费时、成本高，常规工作很少应用；加入胆红素氧化酶或高铁氰化钾等氧化剂将胆红素氧化成较为稳定的氧化产物胆褐素，可大大减低或消除胆红素的干扰；另外，有些要注意的事项如高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇所需沉淀时间和离心速度及离心时间要足够；测定胆汁酸的血清标本应在无菌条件下储存。
总之，伴随现代检验工作步入快车道，医务工作者应该认识到患者的需求不单单是检验提速的问题，在新的器材、添加剂及处理方式带来便利的同时应充分注意到可能潜在的负面影响。实施统一的、规范的、标准的操作有助于保证检验数据的准确度、提高实验室间结果的可比性，这也是质量控制中不可忽视的重要环节。
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