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[求助]杯空白测定和光度计检测数据结果是什么意思

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奇木林 发表于 2011-3-3 14:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

请问杯空白测定和光度计检测数据结果是什么意思?即上面图中红线圈起来的数据分别是什么意思?

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xianyeec 发表于 2011-3-3 14:58 | 显示全部楼层

杯空白的第一行和第二行是指第一个杯子的水空白各波长两次测试结果,下面的数值是各个杯子与第一个杯子的吸光度差,有正有负,但不能超过800。

光密度检查左边的是先前做过的数值,右边的是当前的数值,都是各个主副波长的吸光度值,主要观察340nm的,借以判断灯泡是否正常,如果其他波长突变,则可能怀疑光度计问题,但很少出现。

 楼主| 奇木林 发表于 2011-3-3 15:15 | 显示全部楼层
也就是说是吸光度值?比如第一个14158 ,意思就是1号杯 波长340nm 吸光度为1.4158。根据吸光度A=log(1/T)=1.4158,计算T=1/26.04。也就是说透过的光只是入射光的 1/26.04。是不是可以这么理解呢?如果是这样的话,光信号是通过光度计检测。这个杯空白的入射光强度和出射光强度分别是什么时刻检测的呢?
郑振寰 发表于 2011-3-3 17:21 | 显示全部楼层

你就不要算了,人家都给你算好了,杯间差不能超过±800,个别超过的要整排换杯子,大部分都超过,先把1号杯组换掉。

光度计主要看340nm,不要超过19000,否则灯泡首先就要怀疑。

郑振寰 发表于 2011-3-3 17:23 | 显示全部楼层

用你的图例说话:杯空白大部分是负数,也就意味着1号杯不怎么样了,换一排试试你就知道了。当然,现在也不是不能用。

 楼主| 奇木林 发表于 2011-3-3 17:56 | 显示全部楼层
就是不能理解这个吸光度是怎么计算得来的。照我的理解,做杯空白的时候光电管检测到了出射光的强度。但是要想得到吸光度值,还要知道入射光的强度。入射光的强度怎么得到呢?
郑振寰 发表于 2011-3-3 18:26 | 显示全部楼层

不要太死板,书本的东西和应用是两回事。这属于设计范畴了,使用者无需知道太多。理论上是存在入射光和射出光,还要知道杯的空气空白和水空白,还要知道光度计的暗电流和满电流,也就是100%T和0%T,然后在化学方面还要知道试剂加样本的空白和R2后的反应读点吸光度,根据这些加加减减,还要取对数,还要算常数、系数等等。如果都要搞明白的话,相信没几个人会使用生化,而生化的结果也将没几个人能看得懂。

科学之所以不能被普及,就是因为太拗口太繁琐太专业。所以,对于应用层面来说去繁就简就成为关键,谁在这方面做得好,谁的产品就有市场。但去繁并不是单纯的简单化,人家设计的时候很繁琐,考虑的很多,只不过没有告诉你罢了,因为没必要,一切都在控制之中,更何况就算搞明白了也对你的操作和质控没有任何意义,用户是无法干预的。

简单的跟你说吧,需要知道2组参数就能知道仪器的性能。

首先是光度计检查,这一项告诉你光栅光度计本身有没有问题,如果有问题,那么毫无办法,只有更换。便宜的更换灯泡,贵的换光度计,就这么简单。

然后是杯空白,也就是杯加水空白,这是验证冲洗站系统的主要参数,能不能洗干净,能不能吸干净,清洗剂和水清洗系统是否存在问题,杯子能不能用。

这两点确认了,也就认为仪器可以正常工作,至于结果出现不好的,则单独根据曲线分析判断是样本加入有问题还是试剂加入有问题,还是搅拌系统有问题,那就是见招拆招了,属于独立的故障系统。

当你真正测试的时候,计算变得很简单:杯空白和样本加试剂空白之间可以计算一个吸光度值,加入R2之后根据终点法或者速率法还会得到一个吸光度值,他们之间再遵循公式进行计算得出需要的吸光度值,然后再进行浓度计算。而这些吸光度的计算都遵循一个公式,那就是Log(空白/样本)。

在这里那些入射光,射出光,暗电流,满电流等等都变为常数了,因为都是固定死的,都通过光度计检查和杯空白检查确定下来,而且这个所谓的常数范围很宽,例如340nm不超过19000就行,杯间差不超过800就行,很宽的范围了,而且这么宽的范围足够保证你的结果准确可靠。

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 楼主| 奇木林 发表于 2011-3-3 19:29 | 显示全部楼层
非常感谢老大给我的讲解。我这人有时候就爱瞎琢磨这些东西,尤其是了解的越多,疑问也就越多。了解的少的时候,完全就是别人告诉我怎么做就怎么做,也没有那么多的疑问。可是当看了说明书,再看一些有关吸光度等的资料。疑问就会越来越多。自己琢磨有时候怎么也琢磨不明白,就上来问大家了。希望各位不要觉得我烦。
岳世海 发表于 2011-3-4 09:34 | 显示全部楼层
以下是引用奇木林在2011-3-3 17:56:00的发言:
就是不能理解这个吸光度是怎么计算得来的。照我的理解,做杯空白的时候光电管检测到了出射光的强度。但是要想得到吸光度值,还要知道入射光的强度。入射光的强度怎么得到呢?

很简单的,入射光强度就是个定值,固定的数值,事先定义好的一个数值,这个数值出厂时就调整好的。解释一下:标准的光源灯+符合要求的水浴纯水以及保养得当的透镜和透光窗,入射光强度就被看成和出厂时定义的一样,用于计算出杯空白吸光度。实际上入射光强度是变化的是不一样的(如:光源灯的老化),可是这种“不一样”无关紧要了,想一下此处的吸光度只是相对吸光度,就是说相对于目前条件的吸光度,而不是源于光谱概念的绝对吸光度。正如老郑所讲,这个相对吸光度的允许范围很宽,0.8---1.9ABS。只要有稳定的相对吸光度就行了,样品浓度计算用到的吸光度是相对吸光度,而非绝对吸光度,此处需要的是“稳定”。再想想看,正是这种的变化了的相对吸光度才能反映出光路上硬件的条件变化。例如光源灯的老化发光强度降低使相对吸光度大于1.9,乘上10000后就是仪器显示出来的数值,倒推就是灯故障了。

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小东 发表于 2011-3-6 02:45 | 显示全部楼层
以下是引用奇木林在2011-3-3 15:15:00的发言:
也就是说是吸光度值?比如第一个14158 ,意思就是1号杯 波长340nm 吸光度为1.4158。根据吸光度A=log(1/T)=1.4158,计算T=1/26.04。也就是说透过的光只是入射光的 1/26.04。是不是可以这么理解呢?如果是这样的话,光信号是通过光度计检测。这个杯空白的入射光强度和出射光强度分别是什么时刻检测的呢?

兄弟你首先概念不清,A=-log(I/I0)其中I代表出射光强度,I0代表入射光强度,I/I0就是透光率,你上述计算明显是错的。再来看你问的最后一个问题,首先说说这个LAMBER-BEER定律的表达式,当一束强度为I0的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质,厚度为L的吸收池时,一些光子被该物质吸收,其强度从I0减小至I,通过数学推导我们得到一个A=-log(I/I0)=ECL这个公式,而在实际工作中不是我们真的测一个I0,再测一个I,再去计算得到。而且在实际运用时我们只关注I/I0这个透光率与浓度C或厚度L之间是指数函数的关系就可以啦,由其延伸我们知道吸光度A与浓度或厚度之间是简单的正比例关系就足够啦。你整了个什么入射光、出射光的,把自己都给绕进去啦。

岳世海 发表于 2011-3-6 08:29 | 显示全部楼层
以下是引用小东在2011-3-6 2:45:00的发言:

...... 实际运用时我们只关注I/I0这个透光率与浓度C或厚度L之间是指数函数的关系就可.......

小东版主:觉得此贴有些意义,所以想讨论一下,计算吸光度必须得有出入射光强度,无论何种方式获得,要不透光率怎么算呢。

郑振寰 发表于 2011-3-6 08:55 | 显示全部楼层

没必要讨论了,实际设计中空白就是入射,样本就是射出。因为水空白本身就是调零的意思,这一点不同厂家是不同的,大部分都采样空白调零,只要水空白在一定的范围内就可以了,就可以认为是个常数,不再管它了,当然超过这个范围就会封闭这个杯子或者报警。

而不多的特例里面,以东芝为例,它的光度计带有快门。开机时关闭快门单独测试光度计系统,得出0%T,也就是暗电流。然后打开快门通过两个反应杯的缝隙使光线直接打到光度计上,也就是说不经过任何杯子,那么这就是100%T,也就是满电流,当然这个满电流也是进过水浴槽的水的,这就是所谓的入射光。

然后才是做杯空白,而杯空白其实就是射出光,杯空白的确定其实就是100%T入射光和通过带有水的杯子的射出光之间进行计算的。

而样本呢?也是通过100%T的入射光和样本透射过来的射出光计算的,但这个计算并不准确,因为还有杯空白,样本或试剂空白等等,所以还要把这些带入到里面进行计算。

所以,这个简单的吸光度计算公式其实引发了相当复杂的计算的,而大多数厂家只给出了用户关心的空白问题,包括水空白、试剂空白,样本空白等等,一般不提所谓的入射光和射出光。因为会把简单的应用变得神秘复杂,虽在这设计人员的手里并不是什么难事,入射光的强度一天只测一次或者一周只测一次,而射出光每个测试都不同,每个杯子也不同,每个读点更不同。

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小东 发表于 2011-3-6 15:31 | 显示全部楼层

郑哥说的较明白啦,之前我只是针对楼主所说的L-B定律解释的,郑哥是针对现在主流的分立式分光光度法生化仪的机械流程做进一步解释,其实我写过帖解释过日本两点终点法的计算过程,里面A吸光度通过工作曲线计算得出的过程就是(T)透光率计算的过程,毕竟A=-log(T),对于吸光度计算,定律里那就是笼统的概念,但对于实际仪器运用中有一点终点、两点钟点、速率法等等不同的计算方法,他们的不同就在于消除各种干扰因素、提高灵敏度和选择性方面各有优势。所以各位不要太钻牛角尖,不要死板的认为定律里说吸光度的计算就是要有入射、出射才能得出。那是定律,实际中要延伸的多。

长春惠着 发表于 2011-3-25 08:26 | 显示全部楼层

学习了,太深奥了

aijibingfeng 发表于 2011-5-5 14:25 | 显示全部楼层

自己有待提高啊!

hwanyy 发表于 2011-7-3 16:47 | 显示全部楼层
学习了,谢谢各位老师!
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