[转帖]临床生化检验

在琼脂糖浓度1.5-2％时，只有LDL的ApoB被检出，所以该法测ApoB不准可用于测定HDL中ApoA1、ApoA2，所以 ?????VLDL无ApoA所以不影响ApoA测定 ????2.火箭电泳法： ?????快速、灵敏、抗血清用量少。多用于Apo的测定 ?????观察结果可染色或直接观察火箭峰 ????3.酶联免疫测定： ?????制备指示酶，指示酶与Apo或Apo Ab的交联物 ????4.放射免疫法： ?????125I标记抗原，作为示踪物。双Ab测定，灵敏度高 ????5.免疫比浊法： ?????Ag+Ab → IC，产生浊度 ?????（1）直接测定光散射： ???????需激光或硅晶碘灯为光源的浊度计 ?????（2）透射比浊法： ???????光密度计测定通过混浊溶液的透射光强度 ?四、ApoA1、ApoB的测定 ???〔透射比浊法〕 ????原理：人血清中的ApoA1和ApoB与相应的Ab相遇，即特异性结合，形成不溶性抗原抗体复合物，产生一定浊度，浊 ???????度高低与Ag含量成正比 ????参考值：ApoA1 1.156±0.146g/L ????????ApoB 0.745±0.147g/L ????临床意义： ???????LDL↑、HDL↓　　发生A粥样硬化的危险因素 ???????ApoA1作为HDL的结构蛋白　　　ApoB作为LDL的结构蛋白所以测量ApoA1、ApoB也可反映HDL与LDL含量 ???????虽然HDL、LDL可用chol含量表示，但chol只是脂蛋白颗粒的一种组成，且病理情况下可变所以ApoA1、 ???????ApoB可反映HDL、LDL颗粒多少，所提供的信息不是脂蛋白chol和其他脂类测定所能代替的 ???????冠心病优选测ApoB，比LDL－C、TG有意义 ???????脑血管病，优选测HDL－C、ApoA1↓ ???????急性肝炎后肝硬变，甲亢ApoB↓ ???????II型高脂血症，胆汁瘀积 肾病ApoB↑ ???????急、慢性肝炎、肝硬变、人人透析ApoA1↓ ???????乙醇性肝炎ApoA1↑ 五、AgAb在免疫分析中存在的问题： ??Ag：1.脂蛋白的不均一性。大多数Apo分布在几种脂蛋白中，这些脂蛋白颗粒大小，密度，组成不一致。所以不同蛋白 ?????中同一Apo免疫反应性不同 ????2.Apo抗原决定簇有时被脂质遮盖 ????3.Apo有聚合倾向，形成寡聚体的免疫原性和反应原性与单体不同 ????4.Apo不稳定性。储存中免疫反应性↓ ??Ab：1.由于Ag存在的问题，所获抗血清反应性不同 ????2.动物种族与个体间有差异 1、肝功能的实验室检查 ??一、肝脏的结构特点：P169 ???肝是人体最大的代谢器官 ???1.肝通过门V、肝A双重血液供应 ???2.肝通过肝V与体循环相沟通，通过胆道与腔V沟通 ???3.肝cell膜通透性较高 ???4.肝cell的亚细胞结构物质 ???5.肝cell内含有种类繁多、活性较高的酶类 ???6.肝cell内含有丰富的蛋白质 ??二、肝脏在物质代谢中的作用：P169 ???（一）在糖代谢中的作用： ???（二）在脂类代谢中的作用： ??????合成和分泌胆汁酸帮助脂类的消化和吸收chol → CE ??????所以测定CE更有意义，当肝脏病变，总cholN，CE可能↓ ???（三）在蛋白质代谢中的作用： ??????1.合成蛋白质的重要器官α1α2　β　肝脏严重损害，纤维蛋白原，凝血因子合成↓，有出血倾向　　球 ???????pno在肝合成，凝血因子有部分在肝合成 ??????2.氨基酸分解代谢的重要器官，肝病变，血中aa.↑ ??????3.清除蛋白质毒性代谢产物的重要器官，肝病变，血氨↑ ???（四）在维生素代谢中的作用： ??????是Vit转化，贮存的重要器官　VitA、D、E、K、B12　VitD第25位的　化 ???（五）在激素代谢中的作用： ??????许多H的灭活，排泄与肝有密切关系 ??????eg：肝病变，　固酮灭活　肝硬化腹水、水肿

雌H灭活　　肝掌 ???（六）肝的生物转化作用： ??????氧化、结合、水解 ??三、肝功能试验的临床价值：结合“肝功检查的临床意义”表　 ???1.协助诊断各种肝病，了解肝脏的损害程度、转归、予后 ????ALT（GPT）、BiL，转氨酶 ???2.鉴别诊断黄疸的性质。 ???3.测知令身性疾病对肝脏的损害程度。 ???4.了解各种工业毒物、药物、理化因子对肝脏功能的损害 ???5.判断各种中西药物对肝病的疗效 ???6.肝脏病人术前测定肝功能有助于估计手术的可能性及手术准备工作 ??四、注意事项： 2、血液蛋白质的测定　P49 ??一、双缩脲法：＜实验＞P38 ????O＝C O＝C C＝O ????NH NH NH ????R－CH Cu2+ R－CH Cu2+ CH-R ????O=C O=C C=O ????NH NH NH ????R-CH2 R-CH CH-R ????原理：含两个或两个以上肽键的aa.在碱性溶液中与二价铜离子（Cu2+）作用，可形成稳定的紫红色整合物。 ???????540nm与标注液比色 ????蛋白质↑，呈色越深。是临床测定血清pro，最常用方法 ??二、酚试剂法：＜实验＞P41 ????酚试剂：磷钨酸、磷铜酸 ????原理： ??????pro在酒后酸钾钠存在情况下，与CuSO4络合，与酚试剂形成有色化合物 ??三、紫外分光光度法：＜实验＞P43 ????Lowry-kalckar公式：蛋白质浓度（mg/ml）=1.54A280-0.74A260 ????Warburg-christian公式：蛋白质浓度（mg/ml）=1.55A280-0.76A260 ????酪aa.色aa.在280nm和240nm有吸收峰　　280nm＞240mn ????核酸在280nm和260nm也有吸收峰　　260nm＞280nm ??四、染料结合法：＜实验＞P44 ????蛋白质 解离 -NH+4+染料的阴离子　　　 呈色 ????染料：考马斯亮蓝、丽春红S ????三种比色法和紫外分光光度法的比较 ????方式 灵敏度 化学干扰程度 误差 快速性、复杂性 ????双缩脲 100mg 中等 小 快、简 最常用方法 ????酚试剂 1mg 严重 大 复杂 ????染料结合（考） 1mg 低 大 快、简 ????紫外分光 10mg 较严重 大 快、简 ??五、比浊法： ????蛋白质+三氯醋酸　　沉淀　　增加反应基质浊度 ????与同样处理的标准浓度血清比较 ??六、折光法： ????若液体中含有固体，折光性↑。所以pro颗粒↑，折光性↑ ????误差较大 ??七、参考值：6.0-7.8g/dl ??八、干扰因素： ????Bil、脂类影响结果 ??九、白蛋白测定 ???〔比浊法〕：＊白蛋白正常值3.4-5.0g/dl ??十、球蛋白测定： ???总蛋白值－白蛋白值 ??十一、临床意义：＜实验＞P40 ???总蛋白↑：脱水、慢性感染 ???总蛋白↓：肾病综合症，恶性肿瘤，长期发烧、摄入不足，肠道吸收不好 ???球蛋白↑：多发性骨髓瘤，淋巴瘤，肝硬化 ???白蛋白↓：NS ?血氨的测定 ??一、血氨的代谢： ????来源：（1）肾泌氨 ???????（2）肌肉组织 ???????（3）肠道的菌 ?????????在肝代谢 肝 尿素 循环 尿 ?????????肝受损，尿素↓，血氨↑ ?????????重症肝病，门V，肝V短路，代谢受阻，血氨↑　　脑　　肝性脑病，肝昏迷 ??二、氨中毒与肝昏迷的关系：P189 ????1.多数肝昏迷病人血氨，病情好转血氨↓ ????2.慢性肝病病人摄入高蛋白膳食可出现肝昏迷 ????3.肝昏迷病人脑电图变化与血氨平行 ??三、血氨的测定方法与原理： ????1.纳氏试剂显色法：　1、2共同之处：提供碱性环境，产NH3测定 ?????2NH4++K2CO2 → NH3↑+2K++ H2O ?????2NH3+ H2SO4 →（NH4）2SO4 ??????↓纳氏试剂 ?????棕黄色碘化双汞铵 ?????与同样处理的标准液比较 ??注：用灵敏度高的分光光度计

2.酚一次氯酸盐显色法： ?????NH4++碱性硼酸盐→NH3 ?????NH3+ H2SO4 →（NH4）2SO4 ???? ??注：PH　11-12.4，提供碱性环境，便于NH3生成　蓝色与同样处理标准液比色 ????3.酶法：＜实验＞P96 ????? ????4.（扩散）流动注射： ??四、正常参考范围： ????每种方法均不同　　纳氏试剂　10-60mg8dl 全血 ????酚一次氯酸盐　46-139mg/dl 全血 ????酶法　20-80mg/dl血清或血浆 ??五、注意事项: ????1.立即测定或冰箱保存＜2h所以RBC代谢可产NH3 ????2.吸烟患者及工作人员隔离吸烟环境所以吸烟影响血NH3值 ????3.仪器清洗（酚一次氯酸盐） ????4.密闭容器 ????5.血氨浓度低，需用灵敏度高，特异性高的方法 ?谷丙转氨酶测定（GPT，ALT）＜实验＞P114　P241 ??一、测定方法： ????1.定时比色法：多用于手工、急诊 ?????L-丙aa.+α-酮戊二酸 　ALT丙酮酸+L-谷aa ?????丙酮酸+2，4－二硝基苯肼 丙酮酸-2.4－二硝基苯腙 ??????↓ 碱性 ?????棕红色 ????2.酶联－紫外连续监测法，多用于大型食品，多样品 ?????L－丙aa+α-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷aa ?????P242表15-8 ?????肝功试验：首选GPT ?????丙酮酸+NADH+H+ ?????340nm吸光度↓ ?????谷草转氨酶测定（GOT，AST）见以前笔记 上一页 ¦ 下一页 胆碱酯酶的测定（CHE） ??一、CHE分类: ????真性CHE 假性CHE ????全称 乙酰胆碱酰基水解酶 酰基胆碱酰基水解酶 ????其它名称 胆碱酯酶I 胆碱酯酶II ????来源 神经细胞、骨髓RBC ?肝细胞 ????分布 神经末稍、RBC ?肝、肾等 ????生理功能 破坏神经递质 ?不明 ????底物特异性 作用于乙酰胆碱或乙酰 ?作用于丁酰胆碱，苯甲酰胆碱 ????－β －甲基胆碱 不作用乙酰－ β－甲基胆碱 ??二、CHE的测定: ???（一）分类：1.以乙酰胆碱为底物，测定水解反应生成的酸（H+） ?????????2.以乙酰胆碱为底物，测定反应后剩余的底物 ?????????3.以人工合成的底物取代乙酰胆碱，测定胆碱衍生物的生成 ???（二）测定CHE的方法及原理： ??????1.以乙酰胆碱为底物: ???????1)指示剂测PH法： ????????氯化乙酰胆碱 乙酸 胆碱 ???????2）剩余底物测定法－－羟氨三氯化铁法 ??????2.丁酰硫代胆碱法： ??????? ??二、测定方法及原理： ???1.重氮试剂法： ????对氨基苯磺酸+亚硝酸钠→ 重氮苯磺酸 ????重氮苯磺酸+胆红素→ 偶氮二吡嘧－偶氮胆红素 ????中性:紫色 酸、碱性：兰色 ???2.分光光度法 ????正常值：总胆（TBiL）0.3-1.1mg/dl ????隐性黄疸：血液中BiL大于正常值而小于2.0mg/dl，临床症状不明显，不表现皮肤和巩膜的黄染。 ????黄疸：血液中BiL大于2.0mg/dl，有皮肤巩膜黄染。P185 ????临床意义： ????胆道梗阻 总BiL ????细胞溶血 间Bil ????三种黄疸的鉴别P188表12-14 ???? ???? ???? 甲胎蛋白（AFP） ?????主要临床意义：AFP电泳时出现于 区带 ?????1.肝Ca诊断 ?????2.肝Ca的普查 ?????3.与其他肝病相鉴别 ?????4.协助诊断肝Ca的分化程度 ?????5.判断肝Ca患者的病情及预后 ?肝对染料的排泄试验 ??一、磺溴酞钠滞留试验： ????原理：磺溴酞钠（BSP）注入V后，很快与血浆pro（大部分为白pro）结合而运输，当BSP进入肝血窦后被摄取，与 ????胆红素有竞争作用，然后肝cell将结合的BSP排入胆汁，经胆道系统排出体外。 ????约有2%的BSP，自肾脏由尿排出。所以BSP几乎完全由肝清除和排泄。肝有效血流量，肝、摄取、排泄功能，胆道

?系统通畅受阻，都可使BSP滞留时间延长。
????BSP在酸性溶液中无色，在碱性溶液中呈红色
????A＝A580-（A560+A600）/2消除BiL和血清混浊的影响
????R＝Ct/Co×100% 常用时间30min,45min
????正常值：BSP滞留率 30min<10%
????45min<5%
?注意事项:
???1.注意有无既往过敏史，做好急救准备。BSP可引起过敏反应
???2.气候寒冷时可能出现结晶，因此需加热使之溶解
???3.肥胖病人45min的滞留试验正常值可增至＜87%所以BSP用量与体重有关
???4.白蛋白↓↓或合成不足引起假性正常
???5.除Dubin-Johnsin综合症外，黄疸病人作此试验无临床意义
??二、靛青绿滞留试验：
???原理：靛青绿注入V后，与脂蛋白结合，进入肝血窦，不经与肝cell结合，直接排入胆汁。
??????靛青绿对人体毒性小，随尿排出少，排泄时间短。
??????R＝Ct/Co×100% t:15min
??????正常值：15min0－10％
??三、临床意义：
????肝cell排泄功能，胆道是否通畅。
????肝脏有效血流量
????单胺氧化酶（MAO）
????反映肝纤维化的酶类
????MAO主要存在于结缔组织中，血中MAO浓度可＊反映肝纤维化程度
????MAO是含Cu的蛋白酶，含量少
?????????????MAO
????R－CH2NH2＋O2＋H2O------R-CHO+NH3+H2O2
????临床意义：P245
??? ? 1． 急性肝炎时轻度升高或正常
??? 2． 非活动性慢性肝炎时一般正常，
?? ?3． 活动性肝炎时升高
??? 4． 肝硬化患者70－5． 80％可以升高
?????凡是有胶原性肝外疾病均可升高
?????肝功检查的临床意义
项目 目的 临床意义
ALT 反映肝实质（肝cell）损害的酶 急性肝炎，中毒性肝炎、坏死 性肝炎．明星升高，慢性肝炎， 肝硬化中度或轻度升高。
A／G 肝间质性损害，白蛋白合成能力↓，γ球蛋白↑。 慢性肝炎、肝硬化、肝病晚期梗阻性黄疸
胆红素 反映胆道梗阻，肝cell返流 梗阻性黄疸：D－BiL↑↑，I－BiL↑ 肝细胞性黄疸D－BiL↑,I-BiL↑ 溶血性黄疸D－BiL N或↑，I－BiL↑↑
AKP 反映梗阻性黄疸，胆汁淤积性肝硬变
AFP 反映原发性肝Ca的检测指标 原发性肝Ca,AFP↑↑
染料排泄 反映肝对染料的排泄功能 滞留量与肝cell受损程度呈正比
?碱性磷酸酶的测定（AKP、ALP）
??一、 测定方法磷酸钠法：
????1. β－甘油磷酸钠法：
????????????????AKP
??????β－甘油磷酸钠＋H2O-------甘油＋磷酸二氢钠
??????????????氨基萘磺酸
??????磷酸二氢钠＋钼酸----------钼蓝
??????正常值：成人2.5－6.5布氏单位／dl
??????????儿童4－14布氏单位／dl
????2.磷酸苯二钠法：
?????????????ALP
?????磷酸苯二钠＋H2O-------酚＋磷酸氢二钠
?????酚+4-氨基替比林 高铁 红色醌类化合物 510-530nm
?????正常值：成人3-13金氏单位/dl
?????????儿童5-28金氏单位/dl
???3.磷酸对一硝基酚法：
???????????????ALP
?????对硝基酚磷酸盐+H20-------磷酸盐+对硝基酚
?????对硝基酚在碱性溶液中醌式结构呈红色，在405nm处测定光密度
?????定时比色法：可消除BiL，溶血的影响
?????连续监测法：用于全自动生化分析仪
???4.磷酸百里酚酞法
????
????可清除黄疸，溶血的干扰
????正常值3.2-16.2单位
临床意义：P243
??1.90%以上的肝外胆道梗阻患者ALP升高。
???ALP升高程度与梗阻 程度成正比
??2.癌性梗阻病人ALP值大于良性梗阻病人
??3.肝占位性病变，浸润性病变时ALP显著升高
??4.骨骼疾病可因ALP合成增加，而导致血清ALP升高
???γ-谷氨酰转移酶的测定（γ-GT，GGT）

一、测定方法及原理：
??1.α-萘胺定时比色法： 肝有无占位性疾病，肝Ca、Ca肝转移
??? L- γ－谷氨酰－α－萘胺 γ－GT α－萘胺+L-γ-谷氨酰-γ－L－谷氨酰－α萘胺
???α－萘胺+4-氨基萘磺酸+重氮苯磺酸-红色偶氮化合物
???正常值40U/dl -GT、ALT、AST正常值均＜40u/dl
??2.对－硝基苯胺连续监测法：
?????????????????GGT
???γ－谷氨酰对硝基苯胺+双甘酞-------γ－谷氨酰双甘酞+对硝基苯胺
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　????????　　↓碱性
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　??405nm黄色
?二、临床意义：P244
??1.识别肝内肿瘤存在与否
??2.与肝内肿瘤的大小相关
??3.如果与CEA同时呈阴性，可判断肿瘤有无肝转移
??4. γ-GT Ⅱ同功酶对原发性肝Ca有诊断意义
???计算：eg＜实验＞P83还原钼蓝法测血磷
???血清0.2ml，加三氯醋酸4.8ml，放10min，离心取上清
???测定管血清滤液4.0ml
???标准管 磷标准液0.2ml C林＝4mg/dl
???解：C测＝A测/A标×C标×稀释倍数
???所以C测（mg/dl）=AT/AS×4×0.01×0.2×100╱0.2/5×4
???=AT/AS×0.008×100/0.16
???避免溶血：K+、P、AST、ALT、LDH、ACP
???GLU mg/dl×0.055=mmol/L
???Ca mg/dl×0.25=mmol/L
???P mg/dl×0.32=mmol/L
???NH3mg/dl×0.587=mmol/L
???CHOL mg/dl×0.026=mmol/L
???TG mg/dl×0.0113=mmol/L
???BiL mg/dl×17.1=mmol/L
???CO2 VOL%×0.45＝mmol/L
???BuN mg/dl×0.357=mmol/L
???CK骨骼肌中含量最多 急性心梗4-6h↑，12-24h高峰，2-4d恢复
???AST心肌中含量最多　　急性心梗6-12h↑，48h高峰，3-5d恢复正常
???LDH肾含量最多 急性心梗12-24h↑，48-72h高峰，1-2W恢复
???AST显色反应及底物浓度问题（1）α－桐戊二酸（2）2，4－二硝基苯肼
???产物旁路
???MDH、LDH共同作指示酶
???临床：急肝，手术后，药物中毒AST↑↑↑；肝Ca、慢肝、心肌炎AST↑↑；肌炎、胸膜炎、肾炎AST↑
???ASTm,ASTc
???RBC内LDH活力是血清内的100倍
???准确性和重复性差
???NADH+H+溶于Tnis缓冲液，分别在260nm，340nm监测A，若72.3说明在260nm处有吸收峰的杂质存在，如NAD+，腺苷。
???可抑制LDH
???正常血清LDH2＞LDH1
???急性心梗LDH1↑　　LDH1＞＞LDH2；肺梗塞LDH3↑；急性肝炎LDH5↑（早）
???HBD↑主要反映LDH1和LDH2↑　　急性心梗HBD↑，肝脏疾病HBDN
???N：HBD/LDH＝0.67　急性心梗HBD/LDH0.8　　肝病HBD/LDH＜0.6
???肝、RBC中无CK
???干扰因素（1）GR　　　CK↓（2）AK　　　　　CK↑
???CKMB＞5％诊断心梗
???CK测定应用于肌肉疾病诊断 性连锁遗传性进行性肌营养不良
???CK↑，以CKMM↑为主 多发性肌炎，肌肉损伤
???术后，酒精中毒，脑血管疾病
???运动后
???邻甲酚酞络合酮（1）酸、中性 无色（2）碱性 紫色
???PH11.0
???二苯卡巴腙 PH＜6 无色
???PH7 桃红色
???PH8 橙红色
???PH9深红色
???加2滴HNO3作用（1）提供酸性环境
????????? （2）避免乙醇沉淀血清蛋白质
???TG＞2.26mmol/L高脂血症
???TG萃取剂，吸附剂
???去除游离甘油方法（1）外空白法（2）内空白法
???TG＜4.52mmol/L LDL-C=TC-HDL-C-1/5TG
???黄疸：血BiL＞2.0mg/dl
???隐性黄疸
???外; 免疫性 自身免疫性疾病 药物 同种：新生儿溶血
???生物性 细菌感染
???V感染
???机械性挤压综合证
???DIC
???RBC自身 膜异常 球形RBC增多症，末稍血球形RBC＞25%
???（遗传性）厚＞2.5mn d6mn
???无中心 染区
???椭圆形RBC RBC短轴/长轴＜0.87
???（遗传性）末稍血中的＞15%
????口形RBC
???PNH－糖水、酸溶血、蛇毒溶血
???CD55、CD59碱磷酶
???酶异常G6PD-G6PD检测/高铁Hb还原率
???N＞75%
???Hb异常 Hb电泳（1）初筛（2）测HbA2比例
???提纯 婴儿以HbF多
???未提纯
???HbA之前快速异常Hb
???HbA之后慢速异常Hb
???若有异常，应定量
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