[转帖]常规临床实验室血液标本处理程序

——杨雪、王治国

[摘要] 目的： 讨论常规实验室试验血液标本处理程序。
方法： 针对目前常规实验室试验血液标本处理程序中存在的问题，查阅相关文献，主要参考美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）H18-A4文件相关内容，结合临床应用实际情况进行总结归纳。
结果： 总结了对全血标本，血清，乙二胺四乙酸（EDTA）血浆， 肝素化血浆样本正确的处理推荐的标准程序。强调了标本处理的离心前、离心时及离心后阶段相关的变量。讨论了检验前可导致检验结果在标本采集后不准确或发生系统偏倚的因素，同时也讨论了用于将血清或血浆从血细胞成分中分离处理的体外诊断血液采集设备的性能标准。
结论： 帮助实验室及其它相关工作者在识别和减少、或是消除来自血液标本不恰当处理的分析前阶段错误，提高检验的质量，为临床和患者服务提供更好地品质。
[关键词] 离心；处理；血浆；离心后；离心前；血清；标本

目前对于血液标本处理过程中存在有几方面的问题。具体有：血清或血浆与细胞或与管塞的延长接触；溶血；由于蒸发所致的被测量浓度变化；不正确的储存温度；抗凝剂及血清/血浆分离器的使用；不正确的运输；以及患者结果的周转时间。对这些变量的识别及控制将减少错误，并对患者检验结果的医学使用做出贡献。文本主要参考的是美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）H18-A4文件[1]及相关文献，总结如下：
1 加工全血为血清或血浆样本
血清和血浆应该尽可能地从细胞接触中物理分离出来，除非有令人确信的正确指出长时间的接触不会导致结果出错。

注意1：接触时间短于2h建议用于儿茶酚胺、乳酸、同型半胱氨酸、以及针对RNA的分子检测，比如人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）和丙肝病毒定量分析。

注意2：对于一些被测量，温度会影响其稳定性。

注意3：有许多尚未研究过的被测量。

稳定性指的是被测量浓度在引用研究参数内无意义的增加或减少。
许多被测量未离心可稳定24-48h[2]。 然而有参考文献指出未离心的分析物其稳定性可长过48h[3]。

Laessing 及其同事的研究发现17种被测量（白蛋白、碱性磷酸酶、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、胆红素、尿素氮、钙、胆固醇、肌酸激酶、肌酐、镁、磷、钠、T4、总蛋白、甘油三酯、T3、尿酸）不受离心前血清/细胞接触时间于室内温度长达48h的影响。然而，2h的接触对于葡萄糖（降低）、钾（增加）、乳酸脱氢酶（增加），其结果变化具有重要的临床意义。另外，8h的接触使铁浓度增加，而随着时间的流逝，AST浓度有轻微的增加，氯浓度有轻微的降低。此研究对镁没有指出任何变化；但其他的研究者报告镁浓度在4℃4h接触会增加。

在Chu和MacLeod研究的26种被测量研究中，确定了在室温下72h接触时间的效果。上述多数48h稳定的被测量能再保持稳定24h。另外，淀粉酶、碳酸盐、皮质醇以及γ谷氨酰转移酶（GGT）同样是稳定的。72h接触结果发生逆转的的有葡萄糖（降低）、钾（增加）、磷（增加）、肌酐（增加）、叶酸（增加）、以及维生素B12（增加）。影响极小的被测量有LD乳酸脱氢酶（增加）、氯（降低）、钙（降低）、铁蛋白（增加）、以及钠（增加）。Ruby及其同事在72小时研究中确认了谷丙转氨酶（ALT）在4℃和22℃保持稳定。

除外前述参考文献中的被测量，Rehak和Chiang的研究确定了脂肪酶、甲状腺激素结合球蛋白（TBG），以及促甲状腺激素（TSH）在未分离的血清中7种不同温度（3℃、10℃、15℃、22℃、25℃、30℃以及38℃）下24h的稳定性。 通常情况，22℃～25℃被认定为室温，在22℃时，可以观察到变化发生在葡萄糖（降低）、钾（增加）、磷（增加）、ALT（增加）、AST（增加）、以及肌酐（增加）。温度越高，变化就越大。Ono及其同事研究的另一批时间温度（0℃、23℃以及30℃）证实了许多被测量在温度高于室温（30℃）的不稳定性：葡萄糖（4h降低）、磷（6h降低）、ALT和AST（8h增加）、以及钾（24h增加）。正如期望的一样，钾在温度低于15℃时发生有意义的降低。

在选择的被测量的一些研究中，钙离子在未分离的血清中25℃下只能稳定2h，但是4℃下可以稳定达96h。镁离子在室温下4℃可稳定5天。报告说三环类抗抑郁药物在血清与细胞接触的情况下4℃可稳定6天。

hang及其同事评估了63种被测量在血清与细胞接触情况下24h的稳定性。他们认为对于葡萄糖、钾和磷血清应该在3h内从凝块中分离出来，对于白蛋白、碳酸盐、氯、C肽、高密度脂蛋白（HDL）胆固醇、铁、低密度脂蛋白（LDL）胆固醇和总蛋白应该在6h内。他们研究中的所有其它分析物在血清没有从凝块中分离出来的情况下可以稳定24h。正如作者指出，新的实验室范式下要求对被测量稳定性有更多的知识。从标本采集位点到检验实验室存在有增加运输/时间的问题。

Boyanton和Blick关注了24种常见被测量在标本储存在25℃下未离心状态下56h的稳定性。他们确定了许多被测量在储存超过24h时结果会发生重大的变化，而对于一些被测量，可接受的稳定可达56h。在Pai的文章中，对13种有关心血管疾病的被测量研究了时间和温度条件。他们总结出大多数这些被测量在冰上未离心血浆中稳定可达36h。不同的被测量有不同的最优储存时间，这点应该引起注意以产生一致的和可靠的检验结果。

Ellis及其同事和Diver及其同事，这两个研究团队都研究了激素的稳定性，Diver的团队确定14种激素在未分离肝素化血液中室温可稳定超过7天。他们的数据指出了9种被测量48h稳定性不合格：雄烯二酮、硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）、卵泡刺激素（FSH）、黄体激素（LH）、催乳素、孕酮、17α羟基黄体酮、TSH和甲状腺激素（T4）。在Ellis及其同事的研究中，未离心EDTA标本储存在4℃和24℃下可达24h。在研究的17种激素中，12种可稳定24h：醛固酮、C肽、雌二醇、FSH、生长激素(GH)、胰高血糖素、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）、瘦素、LH、催乳素以及甲状旁腺激素（PTH）。为了获得明确有效的检验结果要求一致的储存温度。

注意：Diver及其同事研究的被测量是在肝素化的血液中，而Ellis及其同事使用的EDTA标本。假如某实验室使用的不是这两种标本类型之一，可能用其研究的分析物血清稳定性不太适当。样本采集后，血清/血浆 准备必须在一个特定的时间框架内完成。这个时间框架对于不同的分析物测量会不同。

N端前脑钠肽（NT-proBNP）未离心标本室温下于EDTA或肝素中可稳定达24h。有报告脑钠肽在室温或4℃可稳定4-24h。

不同抗凝剂（EDTA、肝素和氯化物）的影响，时间间隔（0、24和120h），以及温度条件（室温、4℃和-20℃）对激素在血浆和血清中的稳定性在很少的研究中讨论过。对激素的研究有促肾上腺皮质激素（ACTH）、醛固酮、精氨酸抗利尿激素、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、C肽、雌二醇、FSH、胰高血糖素、GH、IGF-1、IGFBP-3、胰岛素、瘦素、LH、胰多肽（PPP）、PTH、催乳素、和舒血管肠肽。除外ACTH，所有的激素在EDTA或氯化物血浆中4℃可稳定达120h。30℃时，仅FSH、C肽、IGF-1、IGFBP-3、瘦素、LH和PPP在EDTA血浆中可稳定达120h，并且除外ACTH、醛固酮和CRH，所有的激素都可稳定至24h。

1.1 未离心血液标本
对于特殊实验室检验和标本采集器依照制造商的建议。
1.1.1 48h内
在48h内采血，假如血液样本没有离心，在被测量未离心24-48h处于稳定状态，可进行检验，并且在24-48h允许时间框架内可以离心。

1.1.2 超过48h
当血液标本采集后超过48h进行接收并且没有进行离心时，除非有可确信的证据指出长时间的接触时间不会导致结果出错，不然不能进行检验。因此，对于不同的检验标本的稳定性应该据可靠的结果进行定义。

1.2 温度和湿度对标本的影响
在高温和高湿度情况下，有一些自我监测血糖仪测量的手指血糖值以及全血计数同室温和低湿度情况比较可能有显著的变化。错误可能发生在检验的分析前阶段和/或分析阶段，并且必须谨慎对仪器、试剂系统以及采集系统选择，它们会在高温和高湿度情况下将错误降到最低。

1.3 离心前阶段
1.3.1 建议
不管标本采集所使用的器具含有除柠檬酸钠外的添加剂，所有的管子通常应该颠倒至少5～10次以混匀内容物，除制造商有特殊规定外，含柠檬酸钠的试管应该颠倒3～4次来混匀内容物。

1.3.1.1 血清
标本在离心前应该是凝集的。不建议使用木制搅拌试管以释放凝块（见1.3.4.1）。

在室温（20-25℃）下自然的和完整的凝集通常需要30～60分钟。如果患者正处于抗凝剂治疗期间，凝集的时间会延长。冷冻标本（2-8℃）可以延迟凝集。假如对于标本凝集允许时间不足的话，那么潜在的纤维形成可能对许多仪器系统引起问题，导致错误的结果。遵照试管制造商的建议来确保恰当的凝集。

适当时，含有催化剂/加速剂的采集器具可以用于加速凝集（比如，蛇毒/凝血酶，大约2-5分钟；凝血酶，大约5分钟；玻璃或二氧化硅颗粒，15-30分钟）。

1.3.1.2 血浆
当血浆是被要求或可接受时，使用含有抗凝剂的采集器具。抗凝的标本在采集后立马进行离心。

1.3.1.3 冷冻标本（0-8℃）
冷冻标本抑制了血细胞的代谢以及稳定了某些热不稳定的成分。全血标本除非有文件推荐不然不进行冷冻。冷冻的全血标本超过2h不适于钾的检验，这是因为寒冷抑制了糖酵解，而此过程为将钾泵入细胞内提供了能量。没有了此能量，钾会从细胞内漏出，假性增高了结果。检验电解质的标本在离心和检验前不能储存在2-8℃。

为了冷冻标本，应该将其迅速放入冰水混合物中。冷却介质与标本间良好的接触是必须的。大的冰块取代冰水是不可接受的，因为冷却液与标本之间的接触面积不足。必须要有足够的冷却；然而，避免标本与冰（或其他冷却材料，比如干冰）之间的直接接触，因为极端的温度可能导致溶血。

下面是要求冷冻标本的检验实例：儿茶酚胺、氨、乳酸、丙酮酸盐和胃泌素。

1.3.1.3.1 核糖核酸
与DNA和蛋白质相比，RNA材料是极其不稳定的。对于基于RNA的分子检测，检验用血浆应该尽快使用。在大多数分子检测中，允许对标本成批检测；血浆样本可暂时储存在4℃。假如检验不能在48h内进行，血浆样本应该储存在-80℃。当使用特殊的血浆制备试管时，血浆样本在离心后应该转移到另外的小管或检验试管中以储存在-80℃。血浆离心后在同一血浆准备管中储存和冰冻运输，其在冻融循环后可能导致“渗漏物”穿过聚乙烯凝胶屏障。这导致了人为的、解冻后HIV-1 RNA结果的增高。监测在白细胞或肿瘤细胞细胞内的信使核糖核酸的表达要求采取预防措施在其从细胞元中提取出来后来稳定信使RNA。

注意：当血液标本处理用于分子检测时，应该一直戴无粉一次性手套。粉可能是污染的来源之一，并且为影响体外核糖核酸扩增的抑制剂。

1.3.1.4 葡萄糖检测问题
含添加剂（氟化物）的采集器具可以预防标本内浓度在很长的一段时间内发生改变，比如氟化钠干扰尿素酶BUN方法。

注意：糖酵解的抑制并不是马上发生的。因此，在达到稳定的浓度前，此过程可维持一段时间，葡萄糖可能会有丢失。

使用抗糖分解试剂氟化钠在血细胞存在下来稳定葡萄糖25℃可达24h或4-8℃达48h。Chan及其同事确立了氟化钠葡萄糖在室温可稳定72h。

对于新生儿和小儿标本采集用于葡萄糖测定必须给予更多的关注。抑制有核细胞和红细胞（RBC）的糖酵解代谢是非常困难的。这种影响是由高血球比容或白细胞增多造成的。可以使用含有适宜的抗糖酵解剂的微量采集器具用于小儿血葡萄糖采集。

1.3.2 运输
为了获得更多的信息，可参考当地的，地区的和国家法规以及CLSI文件M29。[4]

1.3.2.1 现场采集血标本
1.3.2.1.1 时间和温度
标本必须在适当生物安全袋或容器内在尽可能短的时间内运输到实验室。除非要求冰冻标本，所有的标本都应该在室温下进行运输。假如采集地点的温度高于22℃，其可能导致一些被测量变质，将标本快速运离采集点是尤为重要的。

1.3.2.1.2 试管方向
推荐血样试管在运送到实验室过程中保持于垂直、封口在上的位置。此种位置可以促进完全的凝块形式以及减少试管内容物的摇动，可减少潜在性的溶血。

无抗凝剂的试管，其含有凝胶，应该总是储存在直立的位置直到混匀完成。这样防止了纤维接触到试管密封处。假如允许发生这种接触，纤维伸展，通常缠绕RBC，随着离心（尤其在固定的角头离心机中）将会被推向凝胶栓的上面并且然后血清与RBC和纤维混合污染，导致仪器的堵塞。

1.3.2.1.3 标本摇动和溶血
采集的标本轻柔的处理有助于将红细胞损坏降到最低。溶血的标本可以导致化学的干扰以及干扰一些光学的仪器。Young及其同事已经列出了这些化学成分，其在血清和血浆中的浓度可能受到溶血的影响。已有报告指出血红蛋白含量为20mg/dL（200mg/L;0.012mmol/L）的血浆，其颜色稍微呈粉红色，血红蛋白含量为100mg/dL（1g/L;0.06mmol/L）的血浆，其颜色呈红色。然而，有报告指出血红蛋白含量多达190mg/dL(1.9g/L；0.12mmol/L)可能不总是肉眼明显可见的。血浆中胆红素的增高可能掩盖血红蛋白的颜色，并且假如血浆含20mg/dL(200mg/L；342μmol/L)的胆红素，血红蛋白的浓度为200mg/dL(2g/L；0.124mmol/L)时可能不会被肉眼看出；变色的检测同样也依靠观察试管的直径。

上文列出了所有的预防措施，表1将由1%RBC溶血导致被测量变化程度划分为3个等级：严重地受到影响（>100%）, 明显地受到影响(20%～99%)以及轻微地受到影响(1%～19%)。括号内的百分数代表了溶血标本结果减去非溶血标本结果的差值再除以非溶血标本结果乘以100。当信息在文献中可以获得时，报告被测量值的变化与溶血的程度，溶血通常是由冻融循环或是直接血红蛋白的添加造成的。最好地估算溶血程度的方法是测量血浆游离血红蛋白：溶血程度低(血红蛋白<0.050g/L)，溶血程度中等（血红蛋白0.050g/L～0.30g/L），溶血程度高（血红蛋白>0.30g/L）。然而，对于许多实验室被测量观察的对溶血多种多样和不可预测的反应阻止了一些研究者去建立基于溶血程度结果的可靠的统计纠正措施。一些检验受到溶血的影响大于另外的（见表1）。表1中列出了受到溶血影响的检验典型范例。用户应该查询制造商的文献以获得完整的，测量特异和方法特异的细节内容。

I=增加；D=降低；NC=无变化；Hb=血红蛋白；Hp=结合珠蛋白
注意：此影响取决于测量分析物浓度所使用的方法。

专利蓝是一种惰性的对比染料，用于确定术中淋巴结排到肿瘤浸润区（前哨淋巴结）。在静脉血中出现此染料将会增加脂血指数以及降低溶血和黄疸指数。此方法中染料诱导干扰用于评价潜在的干扰，可能将溶血错认为是一种干扰物。有报告血氧仪检测得出专利蓝假性降低了脉搏血氧值和假性增高了高铁血红蛋白浓度。

技术上的进步将分析全血中的多种被测量（比如，钠、钾、氯化物、葡萄糖、尿素、肌酐和钙离子）变成可能。如果存在溶血，当标本是全血时其现象被掩盖，并且可导致错误的结果。当结果超过了特殊指定浓度时（比如，钾>5.5mmol/L），建议实验室使用全血仪器检查溶血以确定结果的错误是否是由于溶血所致。标本，或是分杯标本，应该进行离心并且要目测血浆。

对于溶血对它们的特定分析物影响的厂商评估总是应检查仪器手册和说明书。

1.3.2.1.4 暴露于光线下
避免对光敏感被测量的血液标本长时间暴露于人工灯光或阳光（紫外线）下是非常重要的。对于胆红素，当监测黄疸新生儿对换血的可能性时这点尤其重要。其它的实例包括维生素A和B6，β-胡萝卜素以及卟啉。这些标本应该用铝箔包裹、棕色标本容器或是相当的物品。

1.3.2.2 外部采集的血液标本
1.3.2.2.1 远距离的采集地点
标本的稳定性要求这其从远距离的采集地点（比如，医生办公室，卫星采血站）到检验地点运输的条件。假如未离心的全血标本被输送到实验室进行检验，它必须在有限的时间内及时到达实验室以对血清/血浆进行分离，以保护被测量的稳定性。如果不能满足这一要求，标本必须在采集点进行离心，血清或血浆从细胞中分离出来并且在适当的条件下保存，直到其运送到实验室为止。第二个试管必须是防漏的。检测实验室也应该咨询已出版的专门的标本处理要求。

1.3.2.2.2 快递服务
使用快递服务来运送来自医生办公室，远距离的采血站，或别的实验室的标本或样本应该特别注意恰当的包装和处理以确保要求试验成分的稳定性。至关重要的是要注意运送的条件，不能太热（夏天运送）也不能太冷（冬天运送）。

1.3.2.3 自动化传输系统
气动管道是标本传送到实验室的主要自动传送系统。结果根据特定的管道系统而不同，但是通常来说，受影响的检验是那些由红细胞膜完整性破坏所致的。最常用的检验有乳酸脱氢酶、钾、血浆血红蛋白及酸性磷酸酶。

其它不适合于气动管道传送系统的被测量是那些必须保持在体温的标本，包括冷球蛋白和冷凝集素。

报告指出在任何管道传送系统中运输并不影响到如下的试验：
· 白蛋白
·碱性磷酸酶
·天门冬氨酸氨基转移酶
·氯化物
· 肌酐
· 葡萄糖
· 钠
·总胆红素
·总蛋白
·尿素
·尿酸
·白细胞浓度
·凝血时间

除非已存在特殊的证据，应该评价自动传送系统、气动的或其它的系统对实验室结果的任何影响。

1.3.3 实验室内未处理标本的接收
1.3.3.1 时间分段关于接收，标本应该进行分类并且准备好进行离心。给凝集发生以足够的时间。血液采集使用的试管含有凝集催化剂（比如，凝血酶、二氧化硅、或玻璃颗粒）应在血液采集后尽早的5～30分钟内进行处理。抗凝的标本应该立马进行离心。同样地要参考制造商的特殊建议。

一些试验要求未分离的、抗凝的全血标本（比如，血铅、环孢霉素、以及糖化血红蛋白[A1c]）。不要将这些标本离心。假如标本意外地进行了离心，不要将其丢弃，将离心的试管送到检验地点以评估和确定标本是否可以重新混匀和进行分析。

1.3.3.2 温度
冷冻的标本（2～8℃）保持在其温度直到可以进行离心。推荐使用温控离心机。

1.3.3.3 试管方向
推荐将血液试管在传送到实验室的过程中处于垂直、封口在上的位置。

1.3.3.4 试管封口
血液试管一直要保持封闭。当试管封口被移去，某些检验结果会不准确，这是因为标本pH的增高，其由于二氧化碳的丢失（如，Ph[增高]、钙离子[降低]以及酸性磷酸酶[降低]）。保持试管于封闭的位置可以消除标本可能的外源性污染，防止蒸发以及溅出和气溶胶的可能性。

1.3.3.5 标本拒收的标准
在如下的条件下，血液标本用作检验目的是不可接受的。在实验室主任/主管水平上的专业判断必须在实践中应用这些标准：
·不适当的标本容器
注意：从病房、门诊、或健康中心采集的标本应该在有紧密接触的盖子的硬性、坚固的、防漏的容器里进行运输。标本容器应该被贴上标签并且运送符合机构的政策。

·不适当的或不正确的标本标识
例1:血液试管没有贴标签或标签不当。
例2：标本的标识与申请的标识不匹配。
对推荐的贴标签要求应该参考CLSI文件H03[5]。另外，可咨询机构政策。

·血液容量不适当
放入试管的添加剂的含量是针对特定的血液容量的。假如采集的血液少于要求的，那么多余的添加剂存在有对检验结果准确性潜在不良的影响。假如采集的血液多余要求的，那么对于添加剂的针对目标其含量是不足的并且类似地可能影响检验结果的准确性。应该参考特定的参考文献来帮助避免采集量少或采集量多的添加剂问题。
例1：柠檬酸钠：凝血酶原时间。
例2：EDTA：细胞压积、细胞计数、细胞形态学、脂类。
例3：肝素：CK、氨基糖甙类（庆大霉素，妥布霉素）。

·使用错误的采集试管
必须考虑到方法特异性的标本的要求。尤其是有添加剂的试管没有区别使用时。某种添加剂可以干扰检测的被测量。
例1：氟化钠在尿酶BUN方法中产生干扰。
例2：在多个血液标本采集过程中错误的采集顺序可以使结果无效，因为添加剂的污染。

·溶血
溶血可以发生在体内或体外。体内溶血也可以是疾病进程导致的血管内红细胞破坏的结果。重复的血液采集以及持续的收到溶血的标本常常指示血管内溶血，同时应该通知临床医生。溶血可以是由穿刺困难或采集标本不当的处理所致。溶血可以发生在血液采集是来自含有非常小或大的内径的连接体的导管。内径的变化可以产生液体或气体的涡流并且导致细胞破坏溶血。有小号的针（23-到25-号）的带翼的输血装置（比如“蝴蝶”）连接到真空试管采集器可以引起体外溶血，由于试管采血是将血液通过小号的针撤在一个强大的力量下进行的，试管撤离时产生的强大的力导致了溶血。某些检验在标本体外溶血时结果是不准确的。

·储存/运送不当
例1：实验室接收到的应该是冷冻（2-8℃）的标本没有进行冷冻。
例2：参考实验室接收到的应该是冰冻的血清或血浆样本实际上是融化的。

1.3.4 离心标本准备
1.3.4.1 凝块释放
对于贴在试管封口或其边上的凝块的释放不推荐使用木制搅拌棒或类似的装置。沸腾试管是实验室导致的溶血潜在来源之一。凝块/细胞的分离实际上是通过在试管/封口设计和生产上技术改进而得到消除的。

残留的纤维，临床实验室可能的干扰物，在采集期间或之后可能是发生不适当的标本处理的次要因素。纤维作为可见的凝块（如前所述）或是可见的微纤维或呈线状，可能存在于主要的采集试管内。这些肉眼可见的纤维线条可以直接影响一些分析，比如肌钙蛋白。纤维干扰通常是不可再生的并且作为纤维从样本中析出随时间而消失。如果血凝以及接下来的离心按推荐时间进行，那么纤维线是可以被消除的。

1.4 离心阶段
对于需要的血清样本离心前的血液标本应该得到适当的凝集。试管的离心是其封口应该是在适当的位置并且离心机要有适当的封盖。
对于全血分析的血液试管是不需要进行离心和分离的。

1.4.1 离心时间以及相对离心力
1.4.1.1 建议
应该参考制造商的说明书，其对于特定血液采集器具做了推荐说明。

1.4.1.2 相对离心力
相对离心力（RCF；g-重力）是比每分钟转数（RPM）更富有意义的术语。RPM是局限于对没有离心模型以及其特殊旋转器和顶部，以及有效的半径的概念的读者。有效的半径是指从转轴到试管内液体底部的距离，在据转轴最远的水平距离。
（a）计算RCF
RCF=1.118×10-5×r×n2
其中
r=旋转半径(cm)
n=旋转速度（RPM）
（b）RCF 计算图（见图1）

图1 RCF计算图

由于离心机的类型和大小差别很大，推荐使用重力（g）代替RPM。离心机顶部的旋转半径是计算的基础，其必须要仔细地确定（见图2）。

图2旋转尖端半径

旋转尖端半径为旋转轴到试管内液体尖端在据旋转轴最大的水平距离。

1.4.2 温控离心机
1.4.2.1 建议
实验室应该有针对温度敏感的被测量的温控离心机。离心机内部可以产热，可能会对被测量的稳定性产生不好影响。特殊的不耐热的被测量应该在4℃下进行分离（比如，ACTH、环腺甘酸）。检查以确保离心机处于其预定的设置。除非有证据支持特殊被测量的特殊温度，不然推荐使用离心机的设置为20-22℃。

1.4.2.2 冰冻标本
运送到实验室的冷冻标本应该在温控条件下进行离心。对于有要求冷冻离心的标本，比如钾，要求迅速地将标本从离心机里取出。温度低于11℃2h后可以假性地提高钾的结果。

1.4.3 再离心
进行钾分析的原始标本试管不应该离心超过一次，这是由于会造成结果假性增高。如果有必要将血清或血浆进一步从细胞中分离，可将血清或血浆转移到另一个试管中再进行离心。

不应该尝试在血清/血浆被从非凝胶或凝胶的试管分离后进行额外的血清/血浆的获取。当血清/血浆从试管中移去且获取了额外的血清/血浆时，血浆与红细胞的含量比就改变了。来自网状渗漏/交换的分析物，由于凝块的收缩而增多，然后被离心进入到血清/血浆中用于了检验，这可以导致错误的结果。

1.5 离心后阶段的建议
1.5.1 血清/血浆与细胞/凝块接触
建议将血清或血浆尽可能快地通过物理方式从细胞接触中分离出来，除非有确凿的证据指出较长的接触时间不会导致结果发生错误。应该始终依照制造商的指南，除非有文件证明不依照不会影响到结果。对于同样的被测量不同的检验方法可能有不同的稳定性要求。

1.5.1.1 储存
1.5.1.1.1 分离的血清或血浆
实验室不断增长的检验数量要求应该咨询特殊的参考文献来确定确保特殊被测量稳定性必要的具体的处理和储存条件。个体实验室有责任使用所有可得的参考文献和/或其本身的研究来决定其实验室特殊的稳定性标准。通常情况，实验室在实施标本接收标准的变化前应该进行验证研究。

1965年Winstern推荐到假如检验在标本采集后5h没有完成，应该冷藏血清和血浆。现在有许多研究指出当试管是封闭的并且血清是与细胞是接触着的时候，许多被测量在室温下可以稳定24～72h。同样也有许多分离的血清的稳定性研究。在2-8℃以及室温下，观察到分离的血清有重要意义的稳定性是2-14天。然而，实验室内的室温（20-25℃）是关键的稳定性参数，对于一些被测量在温度高于22℃时观察到降低的稳定性。

下述为“常规”的推荐：
·分离的血清/血浆应该在室温下不超过8h。假如分析在8h内不能完成，血清/血浆应该冷藏（2-8℃）。

·假如检测不能在48h内完成，或是分离的血清/血浆储存超过48h，血清/血浆应该被冷冻于或低于-20℃。

警示：血清/血浆样本不应该重复地冷冻和融化，因为这可能导致被测量变质。它们被解冻只能有一次。无霜的冰箱不适合于储存，因为冷冻/融化循环让样本的温度增高或降低，使样本进行再冷冻。

用于冷冻的方法包括使用液氮的快速冷冻法，均匀冷冻以避免梯度变化、干冰、或是添加蔗糖、或是二甲基亚砜以稳定冷冻的LDL。
通常情况，冷冻的血清或血浆样本应该在室温下融化。通过加热快速融化可能导致组分的分解。为了阻止融化中浓度梯度的形成，样本应该被颠倒10-20次（无泡沫形成）。如果出现了不溶物，有控制的加温可以将颗粒溶解。

·被测量的文件参考并不属于应该密切遵照的这些常规规则，（比如，胃泌素、钙离子、儿茶酚胺、以及镁离子）。

·假如这些推荐与血清/血浆分离器设备中使用的范例有冲突，则依照制造商的推荐。

1.5.1.1.2 血清/血浆分离器设备
当使用血清或血浆分离器设备时查阅制造商的说明书。
离心后，血清或血浆可以在规定的时间内与凝胶屏障接触。对于非凝胶的设备，血清/血浆可与设备接触的时间是不同的。应该咨询特定设备的参考文献。应该参考制造商的推荐以及局限性。

1.5.1.1.3 防腐剂
抗糖分解的试剂（比如氟化物）可以稳定血浆葡萄糖25℃24h，当血浆与细胞接触时2-8℃可稳定达48h。当红细胞、血小板或白细胞计数出现不正常的高值时则出现不适当的抑制。新生儿标本的糖酵解的抑制是非常困难的。来自这些标本的血浆应该在采集后尽快被分离（见2.1.2节）。

1.5.1.2 试管封闭
血清、血浆以及全血标本一直保持与密封状态(气密)以防止可能的外源性污染、挥发、浓度改变或可能的溢出和气溶胶。

1.6 生物样本库
血液样本的生物样本库正逐渐成为此种类型的未来样本使用的重要前提。生物样本库获得的结果的质量保证和可重复性取决于样本采集、处理以及储存的标准化。接下来的推荐应该让生物库的血液临床样本得到广大的和可靠的使用。

理想地，应该遵照国际生物和环境资源库学会资源库最佳实践。至少应考虑遵照这些建议。

1.6.1 生物样本库标本处理
在进行临床检测前对生物样本库直接取好和保存好分装的标本。同样可以在一个常规的储存期限结束后对搜索生物样本库来储存“临床样本剩余物”。

注1：只有当对进行所有必要的临床生物分析有足够的含量时样本可以加工用于生物样本库。
注2：只有当机构审查委员会/独立的伦理委员会宣布取消知情同意的义务或要求获得恰当的知情同意时样本可以加工用于生物样本库。
按下表2描述的处理生物库标本。

1.6.2 样本标识

每一个样本都应该有一个唯一标识编号。样本可能：
·编码——此过程产生唯一编码并且实验室可以确立编码与患者主要信息之间的联系
·使匿名——此过程产生唯一编码并且编码与患者姓名之间的联系被去除

1.6.3 记录
对临床前生物样本库的管理使用特殊的软件是更好的。软件应该能对主要数据进行加密、样本的跟踪、临床的/生物学的数据动态注释以及储存管理。前面提到的任何变化数据都应该被记录。

1.6.4 分装
应该在聚丙烯试管或吸管内进行一次或多次分装。可能的话，使用像有着预打印条码的吸管或高安全性试管类的坚硬的容器。
如果储存用于核酸分析，将来自全血EDTA试管的分装标本保存在-80℃。

1.6.5 储存
不能储存来自已与细胞接触超过2h的血清/血浆的分装标本。假如血清/血浆与细胞接触超过了2h，保持离心前时间耽搁的记录。
在一个预定时间后（4h），将样本直接冷冻于-80℃液氮中。
当样本提供给研究最终用户时，应该在干冰中进行运输。

2 血清和血浆分离器设备
本节涉及了用于将血清/血浆从全血中分离的各类设备的描述和功能特性。不管设备的类型，阅读制造商的说明书以及仔细地遵照其推荐是非常重要的。如有必要，需要额外的性能和或验证文件。同样可查询许多科学出版物。

基本上，血清/血浆分离器设备可划分为两大类：那些离心中的功能，以及那些在离心后使用的。

为了避免潜在的携带污染，除了急诊检验外，分子检测通常具有优先权。如果对血清或血浆进行分装，第一个分装的标本应该用于分子检测。假如不能进行标本分装，血清或血浆应该用于分子检测且剩余的样本用于其它检测。

2.1 离心中使用的设备
2.1.1 一体化的凝胶试管系统

2.1.1.1 介绍
·血清
一体化的凝胶试管系统将相对惰性凝胶材料结合到血液采集试管中。这些凝胶具有可控的粘度和特殊的重力，重力是介于血清和凝块间的。另外，试管中还含有凝集的催化剂（比如，玻璃或二氧化硅颗粒）。试管壁以及试管封口是可消除细胞或凝块悬挂在试管顶部。一体化的试管系统不能要求将封口移去，直到取出了用于检验或储存的血清的等份。这些系统可有各式各样大小的试管。

·血浆
血浆凝胶试管类似于血清凝胶试管，除了它们含有抗凝剂（比如，肝素、柠檬酸盐、EDTA）代替了凝集催化剂

2.1.1.2 功能
·血清
当血液进入到了试管，凝集催化剂开始激活凝集。5~10次轻柔的颠转采集的血液可以加快凝集的完成和提高凝集的速度。为了最好的结果，推荐保持试管从采集时到离心处于垂直状态。在离心过程中，凝胶材料在血清和凝块间形成了一道相对不可渗透的屏障。特殊的RCF以及时间要求取决于所使用的设备。参考制造商的说明书。

当使用一台固定角度的离心机时，并且如果血清是储存在凝胶上，试管肉眼的观察可检查屏障的完成情况，通过观察凝胶已经形成了45度的角并且不能提供足够的蜂蜡。有必要在固定角度的离心机离心试管的时间长于当使用摆动水桶式的离心机以确保好的蜂蜡。应该据所使用的离心机的类型参考试管制造商对速度和时间指南。
屏障的形成对于摆动水桶离心机更可预见的。然而，这些试管也应该检查屏障的完整性。

·血浆
抗凝剂阻止凝集。通过5-10次地颠转采集的血液可加快抗凝的完成。分离器的功能类似于血清凝胶试管。

2.1.1.3 储存
通常，血清可以存储在凝胶上4℃达48h，除外如苯妥因、苯巴比妥、三环类抗抑郁药（阿密曲替林、丙咪嗪、酰胺咪嗪）、奎尼丁、利多卡因以及雌二醇，其随时间含量降低仅次于吸收进入分离胶内。类似的血浆存储在凝胶上的研究对于大多数检验的被测量显示了相似的稳定性。对于有关的设备应该从制造商获取性能数据。假如超过此时间的存储是必要的，可参考制造商对于特殊的限制的推荐。

如果血清/血浆存储在凝胶上，应该是肉眼可见来观测屏障的完整性。

2.1.2 一体化的凝胶微量采集试管
血清/血浆微量采集试管结合了一个惰性凝胶材料并且是塑料的。快速的凝集受到不可湿润的塑料表面的阻止。血浆微量采集凝胶试管含有抗凝剂肝素锂。血清/血浆可在60~90秒内使用特殊设备RCFs2000~15,000×g进行分离。参考制造商的说明书。这些设备已经可查阅。（可见CLSI文件H04.[6]）

2.2 离心后使用的设备
2.2.1 说明
活塞式过滤器用于血液试管离心后将血清/血浆从凝块/细胞中分离出来。

单个的设备包括有一个于末端含过滤装置的塑料试管。过滤装置的设计和结构应该能阻止血清/血浆通过过滤器回流并且阻止特殊的物质（纤维）穿过到过滤的血清/血浆中。不推荐不能阻止血清/血浆回流的过滤器。
活塞式过滤设备有多种不同型号的血液采集试管。

2.2.2 功能
离心后，活塞式过滤器被置入到采集试管中，穿过血清/血浆轻柔地被推到血清/血浆与凝块/细胞的交界面上的位置。

有必要阻止过滤装置接触到凝块/细胞，因为接触是细胞溶血的潜在来源之一。通过轻轻地将设备从试管中取出在设备与试管内容物之间形成了一道空隙。需要此空气间隙来阻止在凝块/细胞表面的分析物渗漏到过滤的血清/血浆。由于设备的设计不能阻止血清/血浆的回流，此空气间隙就不能形成，将分离的血清/血浆从设备上移去。对于活塞式设备，其可使用血清/血浆的储存，必要有适当的记录来验证分析物的稳定性以及当血清/血浆与特殊的设备接触时没有干扰。参考制造商的说明书。

2.3 试管封口
对于分离设备要求移开试管的封口以取出分离的血清或血浆，必须要采取极其慎重的措施来防止工作区域液体或气溶胶的污染。
此封口被重置或使用一合适的封口。

2.4 设备使用寿命
对于所有的血清/血浆分离设备，遵照制造商说明的储存条件以及有效期以确保设备恰当的性能。

2.5 干扰
不管设备的类型，凝胶或非凝胶，在选择使用的设备之前应该参考科学文献和制造商的说明书。
与凝胶设备有关的错误：
·乳酸脱氢酶（LD）：尽管具有统计意义，使用凝胶设备对于LD所见的差异（增加）被认为是不具有临床意义的。

· 直接抗球蛋白试验（DAT）：凝胶设备不应该被使用于对DAT或使用RBC的免疫血液学检验进行的血液采集。凝胶可以导致RBC粘连在一起，激活凝集。

·治疗药物：当使用凝胶设备对对药物分类如抗癫痫药，心脏病的药物以及氨基糖苷类药物进行血液采集时，实验室必须谨慎。研究是相互矛盾的以及具有设备特异性。

· 三环类抗抑郁药：凝胶设备不能用于对三环类抗抑郁药物采集血液。

3.总结
本文综述了分析前阶段事宜的重要性，其可能干扰临床实验室检验标本的质量。实验室得出的结果完全依赖于对这些会干扰患者结果存在的分析前阶段问题的认识。报告这些错误结果的后果可能导治医疗意外事故、不适当的诊断以及其它可预防的问题。