[转帖]凝血实验操作应注意的几个问题

（1）许多实验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及PH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。孵育时间与温度是在一期法凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37℃下放置超过10分钟，凝血活酶放置时间也不能超过说明书所规定的时限。
（2）血液凝固主要是酶催化的反应，因此实验过程中要严格控制理想的PH环境和溶液的离子强度。多数常规试验都在处于血液生理PH值缓冲范围的缓冲系统中进行。反应混合物的PH值必须处于7.2-7.4之间。
（3）试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。如每次APTT实验时，活化部分凝血活酶试剂和血浆混合物的孵育时间必须一致。混匀过程决定了APTT试验中接触活化的量，在孵育时如果将活化部分凝血活酶与血浆混合的技术不佳，将会改变测定结果。
（4）实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。红细胞膜含有磷脂，溶血标本具有与血小板第Ⅲ因子（磷脂）相似的凝血活性，这种磷脂能缩短溶血血浆的APTT值。标本中如果出现凝块，无论该凝块多么小，均会影响实验结果。
（5）血液与抗凝剂的比例必须相当精确。抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，进而影响实验结果，一定要注意采血时血浆与抗凝剂的比例。

HCT对枸橼酸钠抗凝血浆APTT，PT的影响
HCT（%） PT（s） APTT（s）
10 10.0±0.58 23.3±3.2
20 10.4±0.17 28.2±1.4
40 11.1±0.66 33.3±4.3
60 13.5±1.46 37.2±4.0
70 14.9±0.98 38.5±3.1
80 52.5±7.74 60.5±10.3