[求助]两点法的反应曲线问题

baomasw · 发表于 2012-4-11 22:38

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各位老师好，我弱弱的问个问题：

两点法的测试点一般一个在加R2之前，另一个在加R2之后

但是我也发现RF等的两个吸光度的检测点都在加了R2之后

请问应该怎么分析这俩种的不同呢？

多谢！

郑振寰 · 发表于 2012-4-11 22:48

R2一边一个的，那是两点终点法。都在R2之后的，是两点速率法。

其实没有什么两点法之说，只有终点法和速率法的衍生。

两点速率法是用两个点的吸光度差和两点间的时间差进行单位时间的吸光度变化计算。而常说的速率法，是指一段儿时间内的吸光度变化，当然在设置参数的时候，只给出前后两个点就行了。很容易被人混淆而已。

baomasw · 发表于 2012-4-11 22:55

谢谢郑老师，我还是有些疑问

1，反应方法都是写着：TWO POINT END

2，RF的两点之间的吸光度变化也真的不大。

请问怎么解释？

不好意思，由于手机内存卡坏了，没有拍图片上来。

baomasw · 发表于 2012-4-11 22:59

谢谢郑老师的解答

两点终点法和两点速率法在方法学参数上设置都显示为两点终点法吗？

还有RF的两点之间的吸光度变化真的不大，可以用微小来形容。

这点怎么解释呢？

不好意思，问的问题可能弱了一点

但是我真的不知道。

再次谢谢！

baomasw · 发表于 2012-4-11 23:08

还有请问选择吸光度监测点的时候一共给出的是4个点，我们一般使用的是前面两个

但我发现在CREA的参数设置里面，四个点都设置了，并且后面两个点的时间还在前面两个点检测时间的前面

请问后面两个点是指什么意思？

多谢！

郑振寰 · 发表于 2012-4-11 23:15

设置方法上不一样，你既然发帖到日本板块，那就以日本为例：2点终点法在日本的分析方法设置上叫做2 Point End，而两点速率法叫做2 Point Rate。

据我所知，RF应该是两点终点法，也就是R2前后各一个点。至于你讲的为什么都在R2之后不得而知。也许试剂厂家就是采用2点速率法，也许是设置错了读点，这一切都需要你自己去核对厂家的参数和录入参数是否符合，是否选择了错误的方法。两个两点法英文的头两个字母都是一样的，都是2 Piont，也许是看错了，误选了。这只有你自己去查找了，因为你并没有给出参数和反应曲线，一切都是隔山打牛。打中了是牛点儿背，打不中就对了，就不可能打中。

郑振寰 · 发表于 2012-4-11 23:19

什么吸光度监测点？原文是什么？你到底什么机器？

郑振寰 · 发表于 2012-4-11 23:28

TWO POINT END就是终点法，不可能给你R2之后的两个点，一定是第一个点输错了。

郑振寰 · 发表于 2012-4-11 23:32

RF应该是选择R1和R3，读点是15和31，你最好问问试剂厂家，确认一下吧。应该不会用R2的，所以你说的R2之后也对，它不用R2，用R3替代。所以就不要管R2了。

付远国 · 发表于 2012-4-12 16:39

之前读的话，你可以理解为去除样本本底，我一般是设置这个。现在很多厂家免疫原理反映的，有胶乳成分，R2之后读，相当于去除个胶乳和样本本底吧，我理解为广义的试剂空白（实际试剂空白等于R1+R2+水）！

baomasw · 发表于 2012-4-12 16:57

谢谢大家讲解

我今天用拍了几张图，请各位老师看看

我们用的是罗氏的COBAS8000

baomasw · 发表于 2012-4-12 16:59

baomasw · 发表于 2012-4-12 17:07

拍得不清楚，请原谅，但确实是2点终点法。

还有我要请问一下

assay/time/point中point有四个可以选择的点，请问后面两个是什么作用？

多谢！

郑振寰 · 发表于 2012-4-12 17:12

哦，8000.上面写的是2点终点法，双试剂，R1和R3，所以第一个空白点在R3之前，也就是21点。没有问题，就别提R2了，它就不用R2。

不过，你这个读点确实有问题，竟然在反应之后，问问试剂厂家，是否输错了。应该在18或者19点上。

郑振寰 · 发表于 2012-4-12 17:22

那四个点表示四个不同的用途。如果是一点终点法，输入第一个就行了。如果是两点法，无论是终点法还是速率法，都要填写前两个。

第三和第四点，是用来进行双速率或者双项目使用的，看看操作手册就行了。举两个例子：1、带空白的速率法。第一点为15，第二点为21，第三点为28.这是我瞎编的。表示第一点为空白读点，二、三之间的吸光度差为反应速率，这样把反应速率和空白进行计算得出较为准确的结果。

2、双速率或者双项目，但双项目没有试剂，也就不做考虑。双速率的出发点是R1加入后也会有一个上升或者下降的反应，这个反应也应该遵循速率法的原则，所以，在试剂空白上也进行速率计算，一、二点分别输入10-15，二、三点分别输入21和28，这样，启动液加入前后的速率进行计算，得出近似准确的浓度值。

baomasw · 发表于 2012-4-12 17:27

baomasw · 发表于 2012-4-12 17:31

郑老师，您看看我们的CREA

采用是速率A法，但是point采用的是四个点都有，而且第三和第四个点数都在第一和第二个点数的前面

这么怎么解释呢？

多谢！

郑振寰 · 发表于 2012-4-12 17:32

对，这就是双速率法，空白速率点在后。

baomasw · 发表于 2012-4-12 17:48

哦

谢谢！

请问空白速率是不是只能在填在后面？

不能填在第一和第二个point地方，对吗？

速率是吸光度变化除以时间

CREA图中看来

不管是空白速率还是检测速率都不大啊

这两个也几乎没多大区别

这个怎么理解呢？

郑振寰 · 发表于 2012-4-12 18:08

是，你看看操作手册，上面写的非常清楚。速率曲线的倾斜幅度与浓度有关，也与干扰物有关，不能认为速率法就得倾斜幅度大，平直的就得用终点法。这种平直些的采用速率法的，一般都需要有空白，不然结果真的没法算了。也不能用终点法，否则，高浓度样本就会假性偏低。

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