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WBC分析
WBC值是由C3700系统提供的：
＊ WIC（WBC阻抗计数）
＊ WOC（WBC光学计数）
WOC是以WBC计数进行报告的主要值。在WIC和WOC之间存在临床较大差异时，要对数据进一步评估，以便确定最准确的值。
WIC/WOC相互作用
WIC（WOC阻抗计数）与WOC（WBC光学计数）相互作用，产生可报告的最终WBC值。提供了两种方法，因为没中检测都有强度和局限性。由于每种方法局限性的不同，将两种方法都提供给仪器，以便提高仪器能力，使其能够在存在某些干扰物质和病理条件的情况下，能够提供尽量精确的WBC计数。一个数据分析运算法则会自动对每个检测进行评估，并选择相应的结果进行报告。有CELL－DYN3700系统使用的运算法则分为三个主要区域：1）WOC决策树，用于分析和输出WOC数据；2）WIC决策树，用于分析和输出WIC数据；3）WIC/WOC对照决策树，用于比较两个输出。
WOC决策树为WBC计数和分类计数计算WOC结果。它为纠正和报警提供结果评估。最后，运算法则将带有相应报警的WOC输出到WIC／WOC对照决策树。
WIC决策树为纠正和报警提供评估，并将WIC输出到WIC／WOC对照决策树。
WIC/WOC对照决策树对照两个输出，寻找结果间的差异。如果存在临床意义上的差异性存在，则对结果进行进一步的评估，以找到原因。根据原因的属性（干扰类型），运算法则会根据带有相应报警的（或无报警）WOC值和WIC值哪个更准确，来决定作为WBC来进行报告。
WOC检测过程
本单元对WOC检测进行概述。详情请见本章节使用光工作台的检测以及WBC分类分析。
光通道用于检测WOC数据。使用鞘液试剂制成一份1：51的样品稀释液。WOC检测注射器向鞘液流中注射一定量的该稀释液。样品流随后通过液压集中，使通过WOC流动池（光学石英透明容器）的细胞排成单列。其光源是垂直偏光氦氖激光器。
仪器对传统前向角度光散射（1－3°，归为0°）以及直角光散射（70－110°，归为90°）参数进行检测。两个其他散射－窄角度光散射（7－11°，归为10°）和90°去偏光散射（70－110°，归为90°D）接受检测。此技术属于MAPSSTM（用于多角度偏光散射隔离）技术。这四个检测结合起来用于对WBC子群分类，并提供形态学标记。
注意：从WIC通道得出的数据也可用于增强标记运算法则。
WBC计数是通过对超出计算机在0°通道上所产生阈值的事件数量的计算确定的。从所有四个检测中得出的信息用于将WBC分类进入五个子群：
嗜中性粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
嗜曙红细胞
嗜碱细胞
WOC数据以散点图的形式进行图形表述。也可以根据操作人员的要求以两个直方图的形式表示。
鞘液试剂
鞘液试剂是WOC分析物的组成部分。在鞘液试剂中进行稀释的WBC保持了与其原始状态最为接近的细胞构成。嗜碱细胞的结构由于嗜碱颗粒可溶于水的属性而发生轻微的变化。
由于RBC的渗透压高于鞘液试剂,因此RBC被鞘液试剂所改变。RBC中的血红蛋白从细胞扩散开来，鞘液试剂中的水分扩散进入细胞。尽管细胞膜保持完好，但RBC此时已经与鞘液有着相同的折射指数了，使其无形中呈现在激光下。
图3.4： 光工作台的构成
（图中90°Light Scatter PMT－90°光散射PMT，90°Depolarized Light Scatter PMT－90°去偏光光散射，Polarizer（Horizontal）－偏光装置（水平），Helium-Neon Laser－氦氖激光器（632.8nm）垂直偏光，Front Surface Mirror前部表面镜，Cylindrical Lens柱面透镜，700μm Slit－700μm通光缝隙，Beam Splitter光束分离器，10°Light Scatter Photodiode－10°光散射光电二极管，Front Surface Mirror前部表面镜，125μm Vertical Slit－125μm 垂直通光缝隙，Imaging Lens成象透镜，WBC Flow Cell－WBC流动池，Obscuration Bar遮光条，Perforated Mirror穿孔镜，0°Light Scatter Photodiode－0°光散射发光二极管）
使用光工作台进行的检测
刚工作台装置（见前图所示）包括了组成流式细胞分析仪的部件。光工作的的主要用途是检测在细胞通过流动池时所散射的光。本单元对该检测过程进行说明。
光源是波长为632.8nm的垂直偏光5－mW的氦氖激光器。该激光束通过一个柱面透镜,该透镜能够使其形状由圆形变为椭圆形。该光束随后通过一个125μm的通光缝隙，该缝隙可以将较弱的边缘光束阻断。此处理获得大于80μm宽度的光的强度。从而使细胞流可以在流动池中停留，并暴露在相同的光强度之下。一个成像透镜将激光束聚焦于石英流动池中。
WOC检测注射器将78μL的WOC稀释液缓慢地注射到WOC流动池中的鞘液流中。该样品被液压集中到一个大约直径为30μm的小液流中。这股集中液流使稀释后的细胞排成一列，通过传感区域，从而可以一次对一个细胞进行分析。
由于平均WBC比聚焦激光束小很多，因此细胞不会散射过多激光。如果剩下的所谓轴坐标光可以到达0°检测器，则它会使电子饱和。因此，会通过阻塞条阻止其进入检测器。前向光散射到达一个穿孔镜。0°光散射通过该镜到达0°硅发光二极管检测器。10°光散射从该镜偏转至10°硅发光二极管检测器。
直角散射通过一个700μm 的缝隙，该缝隙阻止源自流动池壁的散射。一台光束分离机随后将直角光散射分割为两个部分。一个部分的光进入90°PMT（光电倍增器管）。剩下的光通过一个水平偏光装置。只有改变了偏光的光（去偏光）才能够通过该偏光装置进入90°D PMT。（PMT的使用，是因为在这样高的角度上所散射的光较少的缘故。）
每个检测器所采集的光信号转换为电信号或脉冲。脉冲根据强度进行数字化，为每个所检测光的角度分配256个通道。
如果脉冲超出0°检测器中的硬件阈值（通道23），则细胞计数器对脉冲进行计数，并对其储存已进行进一步的评估。低于该阈值的脉冲，不会包括在计数中，因此，也不会包括在分类中。如果该原始计数被评估为低于预计值，则仪器会自动继续为进一步的计数阶段计数WBC。对从两个计数阶段中得出的结果进行平均。
从每个检测器中得出的信息，收集在目录模式中。该格式对从四个规格中的每一个中的通道信息进行储存。数据随后用于对分类的确定。
WBC分类分析
光散射信息以地理形式呈现在散点图格式中。（数据也可以以直方图形式提供，根据操作人员的要求。）每个所分析的细胞通过散点图上的一个点位来提供。这些点位位于由X轴和Y轴上指定的通道信息交叉点所确定的点位上。例如，如果细胞落在X轴上的通道50和Y轴上的通道50上，则该点落在两个通道的交叉点上。
散射信息会落在不同的点位上，以便得到不同的信息。C3700系统使用散点图将WBC分类到5个颜色代码的子群中：
嗜中性粒细胞（黄色）
淋巴细胞（蓝色）
单核细胞（紫色）
嗜曙红细胞（绿色）
嗜碱细胞（白色）
注意：嗜碱细胞尽管是以白色显示的，但在彩色打印件上则是以黑色表示。
WBC散点图
图3.5： 单核－多形核白细胞散射
单核－多形核白细胞分割
散射信息位于Y轴上的90°散点，和X轴上的10°散点。(90°/10°散射点显示在前图中。)两个细胞群可以从显示屏上清楚地看到。单核细胞落在三点图左下角的串中，多型核白细胞落在其上部和右侧的串中。
仪器使用动力学阈值确定两个群之间的最佳分割。每个细胞随后被标记为MONO或POLY。在每个细胞都被标记完毕后，会保留此分类，无论其出现在其他任何散点图中。
图3.6： 嗜中性粒细胞－嗜曙红细胞散射
多形核白细胞的分割
散射信息位于Y轴上的90°D散点上，和X轴上的90°散点上.( 90°D/90°散点见前图)只有多型形核白细胞位于该散点上。单核细胞已经进行了标记，因此不会对多形核白细胞的进一步分类产生干扰。
多形核白细胞的两个群可以在显示屏上清楚地看到。嗜中性粒细胞落在两个串的下部。嗜曙红细胞落在串的上部。仪器使用动力学阈值确定两个群之间的最佳分割。每个细胞随后作为NEUT或EOS进行分类。
所有细胞都散射一定量的90°D光。嗜曙红细胞比任何其他细胞散射的°D光都要多，这是由其所包含的独特微粒属性所决定的。该嗜曙红细胞的属性用于对其识别，从而可以明确地将其与嗜中性粒细胞群进行区分。
图3.7: 单核散射
单核的区分
散射信息位于Y轴上的0°散射点和X轴上的10°散射点.( 0°/10°散射点见下图。)单核细胞位于该散点图上。运算法则也使用了嗜中性粒细胞串以帮助对单核进行分类。可以在显示屏上清晰地观察到三个单核细胞群。
之所以有三个单核细胞群，是因为嗜碱细胞为粒状细胞，它比单核细胞的复合物要多。但嗜碱细胞颗粒物易溶于水，并能在鞘液试剂中溶解。因此，脱粒后的嗜碱细胞成为落入单核细胞串的复合性减少的细胞。
淋巴细胞在大串细胞下限极值范围内。（少于淋巴细胞的小细胞群含有不大可能是WBC的颗粒。）嗜碱细胞在以上所提到的细胞串范围内，甚至比淋巴细胞更多一些。单核细胞串超过淋巴细胞和嗜碱细胞。仪器使用动力学阈值对这三种主要细胞群之间的最佳区分进行检测。随后将每个细胞分类为LYMPH，MONO以及BASO。
最后，仪器对低于淋巴细胞串但高于硬件阈值（通道23）的区域进行评估。对任何落入该区域的颗粒通过动力学阈值与淋巴细胞进行区分。以下为可能出现在该区域内的细胞类型。
NRBC
未进行细胞溶解的RBC
巨型PLT
PLT结块
注意：从WIC通道得出的信息用于协助对这些颗粒的区分。
该区域中的所有颗粒都被排除在WBC计数和分类之外。
其他散点图
90°／0°
散射信息位于Y轴上的90°与X轴上的0°散射点位上。
90°D／0°
散射信息位于Y轴上的90°D与X轴上的0°散射点位上。
90°D／10°
散射信息位于Y轴上的90°D与X轴上的10°散射点位上。
所有散点图都可根据操作人员的需要进行显示和打印。
WBC直方图
C3700系统也可以以两种直方图的形式来表示WBC散射信息。WIC也可以以直方图形式（见下图）表示。这些直方图都可根据操作人员的需要进行显示和打印。
图3.8： WBC直方图
MONO-POLY直方图
单核－多形核白细胞的散射信息，是以Y轴上的相对细胞数量与X轴上单核细胞与多形核白细胞大小分布数据进行绘制的。
NWBC-LYM－MONO直方图
非－WBC－淋巴细胞－单核细胞的散射信息，是以Y轴上的相对细胞数量于X轴上的非－WBC－淋巴细胞－单核细胞大小的分布数据进行绘制的。
WIC直方图
WIC数据是以X轴上的细胞相对数量与Y轴上的WIC大小分布数据进行绘制的。
WBC参数
图3.9： WBC数据与散点图
WBC数据通常都是以前面图中的示意图进行显示的。所有字母与数字数据都会自动显示在数据站RUN屏幕上，以操作人员所选定的格式进行显示。在WBC散射信息绘制完毕，且细胞分类到五个子群后，仪器通过在0°通道中计数超过动力学阈值的脉冲对WOC进行检测，并将数据与WIC数据进行对照。随后，运算法则对WBC和各子群中的细胞百分比进行确定。
在WBC计数确定后，每个子群中的细胞绝对数量即可通过将WBC计数与百分比相乘来得出。结果表示如下：
WBC ＃×103／μL (109/L)
NEU ＃×103／μL (109/L)与%
LYM ＃×103／μL (109/L)与%
MONO ＃×103／μL (109/L)与%
EOS ＃×103／μL (109/L)与%
BASO ＃×103／μL (109/L)与%
小数点移动至为绝对数与百分比显示多达三位的小数点位置。
WBC散射信息通常如前图所示，以两种散点图形式表示：
SIZE/COMPLEXITY
大小信息（0°散射）绘制在Y轴上复合性信息（10°散射）绘制在X轴上。
GRANLRTY/LOBULARITY
粒度信息（90°D散射）绘制在Y轴上，分叶信息绘制在X轴上。
WBC标记
有关WIC／WOC运算法则的详细说明，以及所有WBC标记信息，见本章中的操作信息与数据标记。
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