[转帖]雅培蓝宝石血液分析仪白细胞活性指数(WBC Viable Fraction,WVF)的临床意义

【摘要】
目的 室温下[1]比较血常规标本采集后不同时间段内白细胞活性指数（WVF）、全血细胞计数（complete blood count，CBC）及形态学(以白细胞为例)改变规律，以探讨WVF的临床价值。
方法 ⑴在不同时段内（0h 、2h 、4h、 6h 、8h 、12h 、24h）用蓝宝石血液分析仪对同一EDTA-K2抗凝血标本进行WVF和CBC检测。⑵在不同时段内（0h 、2h 、4h 、6h、 8h）用显微镜对同一EDTA-K2抗凝血标本进行白细胞形态学检测。
结果 ①当血标本留置时间（即采集至开始检测的时间）<4h，WVF和CBC无显著性改变（P>0.05）；当血标本留置时间>8h ，WVF、CBC有显著性改变（P<0.05），特别是血小板（blood platelet，PLT）所受影响较大。②当血标本留置时间>2h，白细胞形态有非常显著性变化（P<0.01）。
结论 随着标本放置时间的延长，当CBC、白细胞形态学发生显著性改变时（此时得到的结果已经不能反映患者真实情况），WVF也有显著性改变，表明WVF在解释临床部分标本因送检不及时而使检测结果产生偏差时有重要的参考价值。
关键词 雅培蓝宝石 WVF 留置时间 血常规测定 临床意义 白细胞形态

【Abstract 】Objective Abbott CELL-DYN SAPPHIRE WVF validation parameters change over time when the anti-clotting blood results impact.Methods ⑴By sub-periods (0h, 2h, 4h, 8h, 12h, 24h) Sapphire hematology analyzer with the same EDTA-K2 anticoagulant test specimens WVF and the CBC.⑵By sub-periods (0h, 2h, 4h, 8h) with a microscope on the same EDTA-K2 anticoagulant test specimens WBC morphology Results ① When the blood sample retention time (that is, to detect the time of acquisition) <4h, WVF, CBC and WBC were no significant morphological changes (P> 0.05); When the blood sample retention time> 8h, WVF, CBC and WBC morphology changed significantly (P <0.05), in particular the impact on the larger PLT, this time the result can not reflect the real situation of patients, need attention . ② When the blood sample retention time> 2h, white blood cell morphology changes significantly (P <0.01). Conclusion With the specimen placed on time, when the CBC and WBC were significant morphological changes occur, WVF has changed significantly, indicating that the WVF in the interpretation of the clinical part of the sample submission is not timely due to bias the test results leaving an important reference value when .
Key words CELL-DYN SAPPHIRE WVF Keeping time Blood routine test Clinical significance WBC morphology

【绪言】近年来，随着科学技术的进展，血液分析仪也获得飞速发展。由于它们具有便捷、高效的特点，因而被实验室广泛的引进。现在的血液分析仪除了能提供血液常规检测参数外，还能提供许多研究参数，有关这些研究参数的临床应用国内少有文献报道，故本文拟观察雅培全新一代血液分析仪的新参数WVF随时间的变化规律以探讨其在临床的使用价值。

WVF是美国雅培公司全新一代蓝宝石血液分析仪所提供的新参数。WVF=（WBC-Nonviable WBC）/WBC ，其主要反映白细胞活性，从而提示当前血标本的新旧程度。蓝宝石血液分析仪主要采用多角度偏振光散射法[2]（Multi-angle Polarized Scatter Scatter Separation of White Cell ，MAPSS）对白细胞进行检测和分析，用碘化丙啶试剂对细胞DNA进行染色，破坏有核红细胞膜和细胞质，只留下细胞核（裸核易于染色），该染料试剂对有活性的白细胞只有极小渗透性，故活性白细胞胞核不会被染色，从而鉴定有核红细胞、非活性白细胞和活性白细胞，进而计算活性白细胞指数。

【材料与方法】
1.1 实验材料
1.1.1 标本来源
随机抽取30例体检中心健康体检者静脉血标本，EDTA-K2抗凝（每人2管）
1.1.2 试剂
美国雅培蓝宝石血液分析仪原装配套试剂，BD公司生产的乙二胺四乙酸二钾( EDTA-K2)抗凝真空采血管
1.1.3仪器
美国雅培蓝宝石全自动血液分析仪， Sysmex-Sp1000i全自动涂片染色仪，莱卡DM1000光学显微镜

1.2 实验方法
1.2.1仪器准备
① 严格按照仪器说明书要求对雅培蓝宝石血液分析仪进行保养，分析前质控合格[3]。
② 严格按照仪器说明书要求对Sysmex-Sp1000i全自动血涂片染色仪进行保养，分析前仪器各项功能正常。
1.2.2检测方法
① 对分别放置(室温)不同时段（0h 、2h 、4h 、8h 、12h 、24h）的EDTA-K2抗凝血标本用蓝宝石血液分析仪进行测定，记录WVF及CBC结果。
② 对分别放置(室温)不同时段（0h 、2h 、4h 、6h 、8h）的EDTA-K2抗凝血标本用Sysmex-Sp1000i全自动血涂片仪进行涂片染色，严格按照实验室操作规程在油镜下观察200个白细胞，进行白细胞形态学检查并记录。
1.2.3 记录内容
① 各时段内WVF、CBC的检测结果。
② 各时段内白细胞形态学变化，主要包括以下4种：ⅰ正常，白细胞形态无明显变化；ⅱ退化变性，白细胞出现明显的肿胀性退变；ⅲ空泡，白细胞中出现了2个以上空泡者；ⅳ溶解破坏，白细胞膜已破坏，胞质溢出。
1.2.4 统计学处理
① 采用SPSS 19.0统计软件对不同时段内WVF、CBC的检测结果进行配对t检验（a=0.05）。以0h时间点的结果为对照组，各不同时间点的测定结果与之比较。
② 采用SPSS19.0统计软件对不同时段内白细胞形态学观察结果进行X2检验。将0h时间点血涂片中正常细胞形态与放置2h、4h、6h和8h等不同时间点血涂片进行比较。

【结果】
2.1 不同时段（0h 、2h 、4h 、8h 、12h 、24h）内WVF、CBC的检测结果见表1。

表l不同时段各参数测定结果的均值

由上表可知
1. 放置时间对WVF的影响：随着样本放置时间的延长，WVF开始变化，在4h以内WVF变化很小（WVF>0.990），其改变无显著性（P>0.05）。在6h后，WVF显著降低（WVF为0.981），其与0h比较，改变有显著性（P<0.05）。到24h， WVF值下降了18％，其改变与0h比较，存在非常显著性（P<0.01）。

2. 放置时间对白细胞参数的影响：随着样本放置时间的延长，白细胞参数开始变化，在4h内，白细胞参数变化无显著性（P>0.05），6h～12h 白细胞参数开始有所下降，与0h比较，其改变仍无显著性（P>0.05），但24h白细胞参数均值下降了1.58%，与0h比较，其改变存在显著性（P<0.05）。

3. 放置时间对红细胞及血红蛋白参数的影响：随着样本放置时间的延长，在24h内，红细胞(RBC)总数和血红蛋白（Hb）基本无影响（P>0.05）。

4. 放置时间对对PLT参数的影响：随着样本放置时间的延长，PLT参数开始变化，在4h内，PLT参数总体有下降趋势，但无显著性差异（P>0.05），到6h后PLT参数与0h比较存在显著性差异（P<0.05），到24h，PLT参数与0h比较存在非常显著性差异（P<0.01）。

2.2 不同时段（0h 、2h 、4h 、6h 、8h）内白细胞形态学观察结果见表2。

表2 不同时间内白细胞形态变化统计（%）

由上表可知，0h血涂片中白细胞正常形态与放置2h、4h、6h和8h不同时间血涂片比较形态学均有非常显著性改变（P<0.01）。在0h涂片中，白细胞偶见退化变性细胞和空泡，随着抗凝血保存时间的延长，正常形态的细胞逐渐减少，而出现较多的退化变性、空泡和溶解破坏的细胞，空泡和退化变性的细胞在8h时比例最高，达53.55％；而形成溶解破坏的细胞在6h时最高，达14.61％。

【讨论】血液常规检测是临床上应用比较广泛的检查之一，其在健康评估、血液系统疾病的诊断、疗效观察及常见病的筛选等方面有重要的临床意义。因此，血液常规测定结果的准确性直接影响到医生对病情的鉴别和诊断。据文献报道，导致血常规检测结果产生偏差的主要原因都是来源于分析前因素，特别是血液标本留置时间过长、不能及时送检的因素[4]。当实验室结果产生偏差，而又高度怀疑是留置时间过长造成的时候，由于实验室无法准确得知血液标本从采集到送检的时间，因此无法得出肯定的结论。美国雅培公司蓝宝石血液分析仪的WVF参数能一定程度的反映出所测血液标本的留置时间，提示血液标本的新旧程度。故在讨论检测前误差来源中有重要的临床价值。

由本研究我们可以看出 ，随着样本放置时间的延长，
① WVF开始变化，在4h以内WVF变化很小（WVF>0.990），其改变无显著性（P>0.05）。在6h后，WVF显著降低（WVF为0.981），其与0h比较，改变有显著性（P<0.05）。到24h， WVF值下降了18％，其改变与0h比较，存在非常显著性（P<0.01）。
② 在4h内，白细胞参数变化无显著性（P>0.05），6h～12h 白细胞参数开始有所下降，与0h比较，其改变仍无显著性（P>0.05），但24h白细胞参数均值下降了1.58%，与0h比较，其改变存在显著性（P<0.05）。与文献报道[5]：室温下，WBC可稳定6h～8h， 血红蛋白（Hb）可稳定数天，白细胞形态2h后即有变化相一致。
③ 在24h内，红细胞(RBC)总数和血红蛋白（Hb）基本无影响（P>0.05）。
④ 在4h内，PLT参数总体有下降趋势，但无显著性差异（P>0.05），到6h后PLT参数与0h比较存在显著性差异（P<0.05），到24h，PLT参数与0h比较存在非常显著性差异（P<0.01）。
⑤ 0h血涂片中白细胞正常形态与放置2h、4h、6h和8h不同时间血涂片比较形态学均有非常显著性改变（P<0.01）。在0h涂片中，白细胞偶见退化变性细胞和空泡，随着抗凝血保存时间的延长，正常形态的细胞逐渐减少，而出现较多的退化变性、空泡和溶解破坏的细胞，空泡和退化变性的细胞在8h时比例最高，达53.55％；而形成溶解破坏的细胞在6h时最高，达14.61％。

随着血液标本放置时间的延长，CBC及细胞形态显著性改变时，WVF也有显著性改变。这主要是因为白细胞随着时间的推移逐渐退化变性、空泡及溶解破坏而失活，导致活性WBC逐渐减少而引起WVF明显降低。当WVF>0.990时，标本的各项检测指标是稳定可信的，此时高度提示标本是新鲜的，当WVF<0.950或WV更低的时候，多数指标受到影响，特别是PLT所受影响较大，这主要因为一些标本出现凝集、破坏，加上细胞离开体内正常环境后，由于渗透压、温度、抗凝剂、试管壁的影响，PLT 发生了黏附聚集形成了较大颗粒所致明显减少[6]，此时高度提示标本是陈旧的，此时得到的结果是不能反映患者真实情况的。因此在其它条件（如温度等）不变的情况下，WVF参数的变化对于血液标本留置时间有临床意义，可供同行参考。对于血常规检测的血液标本需在8h内完成，而需要人工镜检分类白细胞形态的血液标本，则需要在2h内完成，以免影响白细胞形态，如果不能按上述要求完成检测时，分析结果误差时应结合WVF综合分析，当WVF>0.990时，结果可信度较高，当WVF<0.950或WV更低的时候，结果可信度较低，需要引起高度注意。

【参考资料】
[1]杨佳，罗舜菁，颜萧，等．温度对全血细胞计数结果的影响．江西医学检验，1999；1 7(4)：203～204．
[2]曾照芳，翟建才.临床检验仪器学[M].北京：人民卫生出版社，2001，3：241-244.
[3]叶应妩. 全国临床检验操作规程[M] . 南京:东南大学出版社，2006：139.
[4]洪宗之. 抗凝静脉血放置时间对血常规检测结果的影响[J ] . 现代中西医结合杂志，2005 ，14 (2) . 230.
[5]丛玉隆，王淑娟．今日临床检验学[H]．北京：中国科学技术出版社，2006：118—120．
[6]戴军方. 血液分析仪测定血小板影响因素. 微循环学杂志，2002 :12 (1):53254.