|
Olympus AU640全自动生化分析仪是日本奥林巴斯生产的大型生化分析仪，该仪器具有精确、灵敏、高速、低耗等特点，分析速度达到800测试每小时，且能实现对反应全过程的监测。Olympus AU640的反应曲线是该仪器的一大亮点，通过查看反应曲线和反应数据，能给用户还原一个完整的反应过程，这对用户发现和解决问题提供了一个很好的线索，几乎所有与结果有关的故障，都可以在反应曲线上找到原因。 1、反应曲线的解析通过User---Reaction Monitor菜单，可以进到反应监测界面。在反应监测界面的左边能提供很多信息，如发生反应的杯号、搅拌棒号、反应所采取的方法、读点的设置、做光电校正（photocal）以及试剂空白的日期等，右边为反应曲线，见图1。该图是血清碱性磷酸酶（ALP）测试反应曲线，双试剂（所用试剂为北京利德曼厂家生产）。
1.1反应曲线的纵坐标为原始吸光度(OD值)：奥林巴斯仪器大部分项目设置的都是双波长，蓝色曲线为主波长的反应曲线，绿色曲线为副波长的反应曲线，主、副波长吸光度之差为反应的吸光度，一般用黑线表示；纵坐标的间隔是不固定的。
1.2 反应曲线的横坐标是测量周期：奥林巴斯设计的是18秒一个读点，10min总共27读点。
1.3 奥林巴斯AU640把双试剂反应分为5个部分，如图1所示：
图1 ALP反应曲线 A点： 0点，加入试剂1（R1）；B段: 0点到1点之间,加入标本（S）且搅拌；C段: 1点到10点之间，为R1+S的孵育时间；D段: 10到11点之间，加入试剂2（R2）且搅拌；E段：11点直至反应结束。单试剂只是少了D、E两步，就不再单独说明。
1.3.1 A点，加入试剂1在A点加入试剂1，这一点的吸光度实际为试剂1的试剂空白的吸光度。对于不同厂家的试剂，A点的吸光度是不一样的，如利德曼的ALP试剂1中不含有发光物质或有效物，试剂空白吸光度较低，说明书对其要求是小于0.6，如上图的0.03左右是正常的。应该经常把该点的OD值与做试剂空白时0点的OD值进行比较，如相差较大，可考虑试剂失效，如可排除试剂失效的原因，重新做该项目的试剂空白。
1.3.2 B段，加入标本在加入标本之后，由于标本本身是有颜色的，必然导致吸光度的变化。标本自身颜色深浅不一，吸光度的变化也不尽相同。如果我们在反应曲线上能清晰看到这一段吸光度的变化，说明标本是加入反应杯中了。
1.3.3 C段，试剂1和标本孵育时间此段时间，试剂1和标本在37℃的恒温环境下进行孵育，吸光度会有一些细小的变化但基本上呈一条平稳的直线，如果呈不规则变化，如波浪样或尖峰样突起，可能是标本或试剂中含有气泡、搅拌棒打杯。
1.3.4 D段，加入加入试剂2由于利德曼的大部分发光物质或有效物质都是在试剂2中，加入试剂2后，吸光度会有一个很大的变化。如ALP试剂2中的对硝基苯磷酸二钠是试剂的有效物质，本身是无色的，但是其在碱性磷酸酶作用下，生成淡黄色对硝基苯酚，后者在405nm处有特异吸收峰，通过测量在405nm处吸光度的变化速率来计算标本中ALP的活性。而如果自10点以后吸光度没有明显的变化，可以考虑试剂2由于某种原因没有加进反应系统中或试剂2失效。
1.3.5 E段，11点直至反应结束这时的反应曲线变化取决于当前测试所采取的方法。终点法、固定法、速率法都有各自的特点，特别要注意的是说明书中对反应方向的描述，如果出现与预期方法学和反应方向不匹配的反应曲线，可以考虑试剂是否失效、试剂摆放错误、对试剂说明书的解读错误等。要理解反应曲线，首先应该要知道生化分析仪的反应过程及反应曲线的设置。以上是我用的AU640的一些设置和自己的一些理解，希望对你有用。
| 
多谢分享
很好，学习了
