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Siemens Advia 系列生化仪参数详解
本详解主要针对的是市场上常见的四种西门子机型：ADVIA1200/1650/1800/2400。大致分为五个章节：简介、基本参数介绍、读点前移、前带监测、参数设置。
一、简介：
ADVIA1650是最早进入中国的拜耳生化仪，虽然师出日本，也是日本电子制造，但还是能看出拜耳的设计理念在里面。后来拜耳被西门子收购，ADVIA生化也保留了下来。
ADVIA系列生化仪都是将ISE作为标配安装，ADVIA1200生化速度是800测试每小时，ISE400测试每小时；ADVIA1650和升级版1800的生化速度都是1200测试每小时，ADVIA2400的生化速度是1800测试每小时。
Advia系列的操作控制软件都大同小异，几乎没有什么本质上的变化，所以延续性较强。加上西门子特有的流水线兼容性，使ADVIA系列的生命力变得异常顽强，在国内流水线市场里占据相当大的份额。
在ADVIA老版本的程序中，是支持四种试剂的，也就是R1、R2、R3和R4；但在后续版本中，四种试剂变为2种，只有R1和R2，这一点厂家并没有说明为什么。
所有的Advia系列，都是两个试剂盘，两个试剂针，反应盘是单盘，塑料反应杯，一根样本针。除ADVIA1200外，都有一个稀释盘和稀释样本针，稀释样本针将原始样本加入到稀释样本盘中，按照最高可达1:75的比例进行样本稀释，然后通过样本针将稀释后的样本转移到反应盘中。同样，在反应盘上也可以进行最高1:75的样本稀释，这样二者相乘，样本的稀释比例高达1:5625。稀释样本盘也是塑料杯，有自己单独的搅拌器、冲洗站。
ADVIA的试剂也可以进行稀释，所以节省试剂。但由于设计理念的关系，其孵育介质有孵育油，也就是油浴。3M生产的孵育油价格较贵，而且需要半年更换。除常规的清洗剂外，反应杯空白比色也需要单独的活化剂，加上稀释样本或试剂用的生理盐水，总体下来ADVIA的耗材较多，而且总成本也不少。
所有的ADVIA系列都是R1+S+R2方式。反应时间可选择：3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、15分钟、长程反应21分钟和31分钟。
ADVIA1200没有稀释样本盘，所以样本直接被转移到反应杯上。加样速度4.5秒，读点13.5秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点42个，R2在19点前加入。
反应杯总数231个，反应体积为80-430ul，R1和R2加入体积范围在5-300ul之间。反应时间可选择：3分钟（最后读点14）、4分钟（最后读点18）、5分钟（最后读点21）、10分钟（最后读点42）、15分钟（最后读点63）、长程反应21分钟和31分钟。
ADVIA1650和1800加样速度为3秒，读点时间是6秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点98个，R2在49点前加入。
反应杯总数221个，反应体积为80-300ul，R1和R2加入体积范围在15-150ul之间。
ADVIA2400加样速度为2秒，读点时间是14秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点41个，R2在22点前加入。
反应杯总数340个，反应体积为60-180ul，R1和R2加入体积范围在10-100ul之间。
二、基本参数介绍：
主读点：M.DET.Pm/n 也就是Main Detect point的简写，m和n是主读点区的起止点，0<m<n，也就是说m和n两点是在启动反应后的两个点，m点的读点必须设置，n可以不设置（填写0就是不设置），双试剂中是指R2加入之后的一组时间点，据此计算吸光度速率或平均值用于浓度计算；
子读点：S.DET.Pp/r。也就是subsidiary Detectpoint的简写，p和r是子读点区的起止点，0<p<r,r点可以不设置。子读点是指需要读取反应空白的区域，一般指启动反应之前的试剂和样本空白，在双试剂中是指R2加入前的一组时间点。
读点：N，在终点法反应中，读点不小于三个，如果小于三个，系统自动前移满足三个。在速率法当中，读点不能少于六个，如果小于六个，系统自动前移满足六个。
根据反应方法，子读点可以选择也可以不选择。
u/d和U/D旗标：U和u表示上限，D和d表示下限，当超过小写u/d范围时，用大写U/D显示。
空白：Blank（u/d U/D），这里指的是试剂空白的上下限。就是以去离子水为样本的检测，主要用来监测试剂性能，是以主读点区主波长的吸光度值为基准的，当试剂的空白吸光度超过u/d上下限范围，就会用U/D显示出来，提醒操作人员注意试剂问题。试剂空白是可以选择是否进行监测的。
Blank u/d的定义是，在下降速率当中，Blank u也就是空白上限为2ABS，Blankd为主读点吸光度的50%；在上升速率当中，Blank u也就是空白上限为最高主读点吸光度的150%，Blank d为主读点吸光度的50%。
图1 Blank u/U/d/D 示意图
修正点： E2。E2表示试剂和样本加入后的几个点的吸光度值，用来进行LIH（乳糜、黄疸、溶血等标本）或底物耗尽的监测。E2都将监测试剂空白以及样本加试剂的结果，也就是说E2=样本+R1的E2吸光度 减去 试剂空白的E2吸光度。
读点前移：Point-Forwarding。在速率法中，高浓度样本往往很快消耗完反应物，而底物却大量存在，速率反应很快停止。当系统监测到这种情况时，会自动将主读点前移至发生速率反应的区域。
在使用读点前移的技术时，需要增加一个主读点M.DET.P l，l<m<n。如果m和n主读点被监测到发生底物耗尽，那么自动前移读取l和m之间的读点。
图2 读点前移示意图
图2所示中，m和n点之间出现底物耗尽现象，由于设置了l点，所以自动将读点移至l和m之间读取。同样，l和m以及m和n之间要多于6个读点。
如果判断底物耗尽，就要借助样本吸光度限制这个概念。
样本吸光度限制：Sampleu/d。Sample u或d只能选择一个，这是根据反应方向的不同而设定的，下降速率反应将只有Sample d，上升速率反应将只有Sample u。其要求监测R2加入之前和之后的数个读点的吸光度值，依然是主波长的吸光度值。R2加入之前的监测点就是我们前面说的E2，R2加入之后的监测点是主读点区的最后两个点，叫做选择点。E2和选择点进行计算：
Sample u/d=选择点的吸光度-（E2*K）
其中：E2=样本和R1的E2点吸光度值 – 试剂空白的E2点吸光度值
K=（R1+S）/（R1+S+R2）是体积系数。
当E2用于底物耗尽探测时，读点自动选取第7点，这样会避开LIH因素干扰。
判断依据，在下降速率反应中，当Sample d大于选择点吸光度时，认为是底物耗尽；在上升速率反应中，当Sample u小于选择点吸光度时，认为是底物耗尽。
图3 底物耗尽示意图
图3的所示中，Sample d 大于主读点区m和n最后两点的吸光度值，所以判断为底物耗尽，自动将读点前移到l和m点。
这里有一个问题，如果m点也处于底物耗尽的区域怎么办？前移的结果也会不准确。所以ADVIA的读点前移技术并不是那么可靠，为了保证可靠，其采用了非常复杂的计算方式，目的只有一个，规避东芝的弹性速率法。
这里简单的介绍一下弹性速率法。其原理是监测速率反应的主读点区，并根据设置的吸光度差值进行没两个相邻读点的吸光度差，当实际读取的吸光度差值小于设定的吸光度差值时，就会判断为底物耗尽。而底物耗尽判断后自动将读点前移至预先设置的两个点的区域，这样可以充分避开ADVIA中的如果m点也在底物耗尽区域的可能。
读点前移不在这里做详细介绍，后面有单独的章节。
反应方法：有五个选择，EPA、RRA、2PA、CRA和IMA；
EPA反应方法：就是常说的终点法，可以是一点终点法，也可以是两点终点法。一点终点法时，子读点p和r无效，填为0；两点终点法时，子读点p和r要填写，而且要在R2加入之前。终点法读点要求至少三个点，不足三个点时，系统自动前移补足。
图4 EPA终点法示意图
RRA反应方法：也就是常说的速率法，可以是单速率法，也可以是双速率法。采用单速率法时，读取主读点区的m和n的区域进行每分钟速率计算。采用双速率法时，还要读取R2加入之前的子读点区p和r的区域进行每分钟速率计算，然后主读点和子读点相减再进行浓度计算。使用速率法时，系统将自动进行E2吸光度计算。但在参数设置，可以选择是否选择E2 corre ，也就是是否选择E2修正。用DO或Not Do选择。
在速率法当中，Blank u/d必须输入，并且可以选择在R2加入前一点插入检查点CHECK D.P.I，此检查点将于试剂空白数据进行比较，借以判断试剂是否有问题。但此法仅在下降速率法和IMA方法中使用。如果不使用，则填写0。
当然，在速率法当中，也可以选择底物耗尽监测而增加的主读点M.DET.P.l。
图5 RRA速率法示意图
2PA反应方法：也就是常说的两点速率法。也是速率法的变种，区别在于不进行主读点间的两个点的线性监测。其余与速率法完全一样。
图6 2PA两点法示意图
CRA反应方法：官方说法为随着时间的变化反应接近恒定，曲线由最小二乘法拟合，也有称为固定点法。大致意思是选择读点区的两个点进行吸光度值得最小二乘法计算。是根据时间和吸光度的数值进行计算的，无论是速率法还是终点法均可采用。
当子读点被采用时，p=r≠0，或p≠0，r=0时，是速率法，速率计算是根据两点间曲线的正切线；当p<r时，用两点间连接直线进行计算。当不采用子读点时，为终点法，采用最大时间吸光度和空白吸光度进行计算。
说实话，真不知道这个方法是做什么项目的，中文没有解释，英文的解释很少，也没发现实例。
图7 CRP固定点法示意图
IMA反应方法：也就是免疫比浊法。是采用最小二乘法计算的速率法。对于R1的加入量太少，无法进行E2计算时，这个方法就变得有用了。
也就是说，在很多免疫比浊项目里，R1的加入量往往小于R2的量，所以引发了一系列的计算和判别上的困难，IMA就是为了解决这个难题的。
样本和第一试剂加入量太少，就无法进行E2的计算，没有E2就无法进行前带监测和底物耗尽的监测，所以在 IMA方法中R2之后插入监测点Check D.P.I,用于弥补R1和S的不足。
采用IMA方法设置检查点后，系统自动计算limit values值（设备默认0.003），此法对浑浊样本的处理很有成效，所以用在免疫比浊项目上。
图8 IMA免疫比浊法示意图
图9 IMA应用示意图
IMA的其它使用方法与速率法一样，仅限于R1+S低于反应杯最小容量的测试项目里。如果不存在这样的项目，那么即便是免疫比浊项目，也应该采用常规速率法或终点法。
定标方法：因数定标、线性定标和非线性定标；
在参数界面里的Calc mthd，也就是计算方式里，有ABS和STD/MSTD选择，表示吸光度和单点定标/多点定标计算。在ADVIA的所有机型里，定标中的零浓度点用试剂空白替代，所以在定标之前要做试剂空白，如果不做试剂空白，仪器会认为试剂空白就是原点。注意这个差别，与奥林巴斯的不同。奥林巴斯的试剂空白和零浓度校准点是两个概念，而在adiva里合二为一。
参数界面里的Formula，也就是公式才是选择定标方法的地方。
因数定标：如果在Calc mthd里选择ABS，那就意味着你要采用因数定标，那么在Formula里只有一个可以选择，那就是Linear,因数定标只能用于线性定标。
因数定标也就是直线方程里的Y=KX+B中的K，所以也叫K值定标法。而B的确定则需要试剂空白，所以因数定标法必须做试剂空白，然后结合给出的K值进行定标曲线的绘制，然后依据这个曲线进行浓度计算。在Advia中，K值的给出是在参数界面的Standards setting中的FV中。
线性定标：线性定标需要两个点才能决定一条直线，我们一般给出一个零浓度点，一个带有浓度的标准点，这样仪器就会自动进行计算。而Advia中零浓度点在试剂空白里给出了，所以对于两点线性定标来说，只需要在给出一个校准点就可以了。所以在Advia的手册里，线性定标叫做一点线性。而且Advia的所有校准点，无论是线性还是非线性，零浓度点都不计算在内，只数带有浓度的校准点，比如5点定标，加上零浓度点其实就是6点；而6点定标，加上零浓度点就是7点。
不过，要指出的是，Advia的试剂空白并不是强制性的，这一点与奥林巴斯不同。不进行试剂空白检查的项目，默认试剂空白也就是零浓度点的值是通过原点的。
下面给出两张图，一张做过试剂空白的线性定标，一张是没有做过试剂空白的线性定标。
图10 没有做试剂空白的线性定标
由于假设所有没有做过试剂空白的线性定标的零浓度点都通过原点，所以图中的蓝线则是默认的校准曲线，但实际上并非如此。如果提前没有做试剂空白，仪器也会自动做上，这样就会出现两个点，图中的两个红点就是。左下角是零浓度点，右上角是标准店。但蓝色的定标曲线却是右上角的红点和原点的连接，而不是与零浓度点连接。这样的结果我们都知道会有错误，因为真正计算的是按照蓝色直线计算，而红色的我自己画上去的示意线条才是真正的计算直线。
要解决这个问题，只有重测试剂空白重新执行定标才行。
下图是做过试剂空白的线性定标图例：
图11 做过试剂空白的线性定标示意图
而在statistical Data里的FV就不是因数了，而是定标点的浓度。上面两张图很清楚的告诉我们，一点线性定标，有一个Blank试剂空白，FV为0.00，而STD值只有一个，就是标准点的值。
图12 Advia一点线性定标示意图
在线性定标中也有多点定标，例如同工酶法。在Advia中，线性多点定标多是用来拟合一元三（二）次直线方程。对此有三种方法，由于很少使用，所以仅仅图示，不做解释。
图13 无变换一元三次直线方程定标
图14 对数线性变换的一元三次线性方程定标
图15 对数变换的一元三次线性方程定标
同时，Advia还提供一元二次线性方程定标。
非线性定标：Advia的非线性定标有Logit-Log1、Logit-Log2、Logit-Log3和Spline样条曲线、Iine graph折线五种。
图16 Logit-Log1非线性定标示意图
图17 Logit-Log2非线性定标示意图
图18 Logit-Log3非线性定标示意图
图19 Iine graph折线非定标曲线示意图
图20 Spline样条非定标曲线示意图
在多点定标中，由于试剂随着使用时间的推移性能会发生改变，其中包括颜色的改变。所以每天开机画面中会提供简单定标（Simplified calibration）这个选项，原理是根据前后试剂空白修正整条定标曲线。
图21 Simplified calibration简单定标示意图
在图11中，左侧是定标细则的选项，其中，Calc.mthd表示计算方法，有ABS（因数法）、1-Point（1点定标）和Multi-Point(多点定标)三个选项；
在Axis Conv.轴线变换中，有No Conv.（不变换）、Log.-Linear（对数线性）和Log.-Log.（对数）三种选择；
在Multipoint Formula（多点公式）中，有Linear（线性定标）、quadratic（一元二次直线方程定标）、Cubic（一元三次直线方程定标）、Spline（样条曲线）、Line Graph（折线）、Logit-Log1、Logit-Log2和Logit-Log3等8种方式；
在# cal Stds里，要填写包括试剂空白在内的校准点数量。
图22 多点非线性定标示意图
从图中我们看到，四个校准品的数值成梯度倍比关系，但无法做出满意的样条曲线，是否需要改为对数曲线还需要观察。
图23 原厂试剂多点非线性定标示意图
这是原厂的IgM定标曲线，没有做试剂空白。定标浓度并非梯度倍比稀释，但只有这样才能保证Logit-Log3曲线的完美。好像国外很少使用样条曲线定标。而这个项目恰恰是样条曲线。如果用最高浓度倍比梯度稀释，就会得到一幅漂亮的样条曲线。
三、读点前移：
前面说过，Advia的读点前移技术是为了应对底物耗尽的速率反应，采用样本吸光度限制Sample u/d和试剂空白限制Blank u/d来进行计算和判断。要知道是，底物耗尽有时并不是因为样本的浓度或活性太高导致的，试剂污染或失效也有可能。所以读点前移技术和底物耗尽判断，从另一个方面讲，也是对试剂性能的一个监测。
由于底物耗尽仅仅存在于速率法的反应当中，所以这里描述的均为速率法。
下面两张图就是超过Sample u/d限制后的底物耗尽图例：
图24 间接或相反反应超过Sample d限制的底物耗尽反应图示
图25 直接反应超过Sample u限制的底物耗尽反应图示
注意图25中27点出现的拐点，这已经是不明显的底物耗尽的表现。
样本吸光度限制和试剂空白的配合使用，加上检查点checkD.P.I的介入，可以很容易的判断试剂性能。
下图是极端情况下的试剂空白限制的图例
图26 试剂空白图例
通过试剂空白计算出来的Blank u/d值与样本测试时主读点区主波长吸光度值进行比较，如果超出这个范围将会用U/D来标示结果，以提示操作人员该结果不可靠。
检查点check D.P.I的选择一般在R2也就是启动反应物加入之前或之后的一个点，而E2的吸光度计算点则选择在6、7、8这三个读点上。注意这仅仅是用来监测底物耗尽的，如果用E2来监测LIH样本，则读点应该在2、3、4、5这些地方。
在直接反应中，也就是单试剂项目里：
当check D.P.I的主波长吸光度值大于Blank u 的值时，结果用u标示；
当check D.P.I的主波长吸光度值小于Blank d 的值时，结果用D标示；
在间接反应中，也就是双试剂项目里：
当check D.P.I的主波长吸光度值大于Blank u 的值时，结果用U标示；
当check D.P.I的主波长吸光度值小于Blank d 的值时，结果用d标示；
这就是结果里“U/u/D/d”这四种旗标的来历。
下面举例说明读点前移技术的使用：
图27 读点前移举例1
图27中的三个曲线：红色是试剂空白，蓝色是正常样本曲线，绿色是异常样本曲线。
图中有两天竖线，一个E2，一个是check D.P.I，那么根据图示可以得到以下数据： | | E2吸光度值 | 试剂空白修正E2（E2-试剂空白） | | 试剂空白 | 0.10 | - | | 正常样本 | 0.50 | 0.40 | | 异常样本 | 0.60 | 0.50 |
那么经过体积修正过的E2是要计算修正系数的，而修正系数=（R1+S）/（R1+S+R2）。
这里假设R1是80，S是16，R2也是16，这样修正系数就是0.875。
那么经过体积修正过的正常样本E2就是0.343，异常样本E2就是0.429。
同时我们也知道，Check D.P.I在R2之后，其正常样本为0.55，异常样本为1.00。
那么体积修正过的Check D.P.I-E2的值是：正常样本是0.207，异常样本是0.571。
根据试剂空白的原则，Blank u应该是0.40，Blank d 应该是0.05。
那么我们用Check D.P.I和E2的差值与Blank u值的0.40进行比较，正常样本的差值0.207小于Blank u值的0.40，而异常样本的差值0.571大于Blank u值的0.40，又是间接反应，所以结果报告U。
图28 读点前移举例2
图28的例子里，红色为试剂空白，绿色为异常标本2，蓝色为异常标本1。很明显，异常标本1是典型的底物耗尽反应，而异常标本2貌似没有问题，但R2加入之前就过高了。 | | E2吸光度值 | 试剂空白修正E2（E2-试剂空白） | | 试剂空白 | -0.0041 | - | | 正常样本 | 2.6119 | 2.6160 | | 异常样本 | 1.7154 | 1.7195 |
经过体积修正后的E2分别是：异常样本1为2.242，异常样本2为1.474；
Check D.P.I值为：异常样本1为2.4665，异常样本2为1.4670；
E2和Check D.P.I的差值为：异常样本为0.224，异常样本2为-0.007；
Blank u值设为0.20，Blank d值设置为0.01。
异常样本1的差值0.224大于Blank u的0.20，又是间接反应，所以结果报告U；
异常样本2的差值-0.007，小于Blank d的0.01，又是间接反应，所以结果报告d。
这是两个利用试剂空白限制和E2以及Check D.P.I检查点进行底物耗尽判断的例子。在这两个例子中，试剂空白放的很宽，并不是严格按照150%和50%最高最低计算公式计算的，但即便是这样，例子中还是判断为底物耗尽。
而在参数设置里，Blank u/d往往被设置成±9.9999，这也就意味着不进行底物耗尽判断和试剂空白判断，那么Check D.P.I和M.DET.P.l的设置也就变得毫无意义了。
样本吸光度限制Sample u/d在底物耗尽中的用途呢？其与试剂空白Blank u/d可以同时，也可以单独使用，监测底物耗尽依然有一定的作用。
图29 样本吸光度限制Sample u/d在底物耗尽判断中的示意图
图29的上图是选择点吸光度值大于Sample u，下图是选择点吸光度值小于Sample d，所以都被判断为底物耗尽。下面举例说明计算方法：
图30 Sample u/d判断底物耗尽的例子
图中红色为试剂空白，蓝色为异常样本。试剂空白的E2为-0.004，样本的E2为0.6127；
Sample u/d=1.25-[0.6127-（-0.004）]*{[16(S)+80(R1)]/[16(S)+80(R1)+16(R2)]}=0.7215；
经过修正后的曲线就是蓝色虚线部分，那么主读点区的最后两个点的吸光度也就是选择点的吸光度值只有0.250，远远小于Sample d 的0.7215（图中放宽到0.750），所以判定为底物耗尽。（下降反应是Sample d，上升反应是Sample u）。
判断底物耗尽后，就需要读点前移。而采用读点前移，还需要一个M.DET.P.l读点。
图31 读点前移的各种可能图示
在这个图示中，主读点M.DET.P.m和M.DET.P.n之间出现底物耗尽现象，读点前移就是读取M.DET.P.l和M.DET.P.m之间的吸光度速率。图中给出的M.DET.P.m正好在拐点上，这种可能性太小了。红色箭头才是更多的M.DET.P.m可能性之一。
当然最理想的状况是左侧的红色箭头，如果是右侧的红色箭头，即便是读点前移也毫无意义。
由此可知，Advia的读点前移技术相当的复杂，并不是那么容易掌握，而且在前移点的选择上也很令人抓狂，远不如东芝的弹性速率法简单。不过，利用这种技术不仅可以判断试剂问题，也可以判断反应过程中的问题，还是很有帮助的。
我们要清醒的知道，利用读点前移技术，必须进行试剂空白检测，并且计算出Blank u/d和Sample u/d，还要知道检查点Check D.P.I的设置和前移点M.DET.P.l的设置，否则无法使用这一技术。
四、前带监测：
Prozone前带监测功能是几乎所有生化仪都拥有的，Advia系列也不例外。更何况Advia强调免疫比浊功能，所以前带监测的设置与IMA的设置在一起，同在参数界面的一个区域里。
图32 前带监测界面示意图
前带现象可能会导致实际结果偏低，这与底物耗尽类似，但在曲线上，而且截然不同。
在前带监测选择里，前带计算公式可以选择前带公式（用于终点法项目），也可以选择速率公式（用于速率法项目）。无论选择什么公式，Prozone Limit前带范围都要输入，这也是前带发生反应的实际吸光度值，超过这个值就会判定是前带反应。
Prozone judge是前带的反应方向，这个方向决定是高于还是低于ProzoneLimit值，来判断前带现象。
如果选择速率公式，那么必须输入judge limit的值，这个值低于前带子读点的吸光度值，将不进行前带检查。
M.DET.P.m/n和S.DET.P.p/r则为用于前带检查的主读点和子读点，这与常规参数里的不同，也就是参数设置里的Calculations method setting里的M.DET.P.m/n和S.DET.P.p/r完全不同。而且只有选择了前带监测才有效。
下面举例如何使用前带监测：
图33 前带监测举例
图中的实线是正常样本，虚线是前带样本。
实线A的主读点中间值为M.DET.P. m 88 –n 90= 0.750，子读点中间值为S.DET.P. p 51 – r 53 = 0.400。主读点与子读点的吸光度差为0.350。把这个数值作为Prozone Limit值。
虚线B的主读点中间值为M.DET.P.m 88 –n 90 = 0.726，子读点中间值为S.DET.P. p 51 – r 53 = 0.667。主读点与子读点的吸光度差为0.049。
Prozone judge设置为向下范围，0.049小于0.350，所以发生前带现象，因此结果带有p标示，提醒操作人员注意。
如果是低浓度反应，可以讲前带主读点设置在启动反应之后的几个点，而子读点可以设为0不用。
下图是Advia1650的设置参数，R2加入点为49点。
图34 前带监测的设置举例-Advia1650
而在速率法中，前带的现象也会导致结果偏低。
图35 速率法前带现象图示1
上图中曲线A是高浓度校准品，曲线B是同值的高浓度样本。校准品由于经过处理，所以不会存在前带反应，而样本则不然，几乎无法避免。
图36 速率法前带现象图示2
上图可以看出，主读点区内的速率相差很大，高浓度校准品速率为0.050，高浓度样本的速率为0.031，由此计算出来的浓度值或活性值将会相差很大。
图37 速率法前带监测的计算图示
上图中，高浓度校准品主读点的中间值是M.DET.P. m 90 – n 95 = 0.044 ，子读点的中间值是S.DET.P. p 51 – r 56 = 0.046，速率比值 mn/pr =0.96，把这个值当做Prozone Limit值。
高浓度样本主读点的中间值是M.DET.P. m 90 – n 95 = 0.022，子读点的中间值是S.DET.P. p 51 – r 56 = 0.177，速率比值 mn/pr = 0.12。
Prozone judge设置为向下范围，0.12小于0.96，所以发生前带现象，因此结果带有p标示，提醒操作人员注意。
如果是低浓度标本，会不会导致误判呢？下面举例说明：
图38 低浓度样本速率法前带监测图示
曲线A还是高浓度校准品，曲线C为低浓度样本，图中看出没有前带现象。
低浓度样本主读点的中间值是M.DET.P. m 90 – n 95 = 0.007，子读点的中间值是S.DET.P. p 51 – r 56 = 0.016，速率比值 mn/pr = 0.44。
Prozone judge设置还是为向下范围，Prozone Limit值还是0.96，那么0.44小于0.96，还是会报告前带现象，结果p表示。
为了解决这个误报，在速率法进行前带监测时，要采用Judge Limit值，这个值低于子读点的吸光度中间值时，将不进行前带检查。
下图就是参数设置画面：
图39 低浓度样本前带监测设置图示
这样设置，低浓度样本就不会进行前带监测。这也是为什么出现前带现象后，稀释样本重测的原因。
综上所述，我们知道，设置前带监测需要使用没有前带现象的样本或校准品进行Prozone Limit和Judge Limit的计算，同时也要知道前带现象的方向，从而设置Prozone judge，还要清楚的知道前带主子读点的设置位置。前带子读点一般在启动反应后的几个点，前带主读点一般在启动反应后的最后几个点。前带读点与计算读点并不冲突。同时前带监测与底物耗尽监测也不冲突。
需要指出的是，启用前带监测，速率法效果非常明显。而对于终点法，特别是两点终点法来说，效果并不是很明显，浓度或活性差别并不大。
五、参数设置：
Adiva系列由于型号不同，版本不同，参数界面也有所不同，但都大同小异，区别仅仅在四种试剂或两种试剂、定标设置是单独的界面还是在同一界面下等等，所有的标题和字段位置有些换位，仅此而已。
下面是我手头上有的几个型号版本的参数界面图：
图40Advia1200的新增项目流程图
这个图很有意思，按照箭头步骤一步步设置完，新项目也就设置成功了，把项目注册、参数设置、试剂位注册、定标质控位注册、定标质控靶值设定都包括在内。
图41Advia1200的参数设置界面
图42 Advia1650 老版本参数界面
图43Advia1650 新版本和Advia2400的参数界面
图44Advia1800的参数界面
我们以新版本的Advia2400界面（图41）为例，这也是Advia1800的参数界面，将尽可能详细的解释一下参数设置的注意要点。
Analytical condition 分析条件界面：
图45 analyticalcondition分析条件界面
这个界面主要是设定试剂和样本的加入量，以及样本和试剂的稀释比例，同时设定反应时间和搅拌方式。
R1/R2 volume是试剂加入量，每个型号的设备不同，对此的要求也不同。以Advia2400为例，R1和R2的加入量不能超过100ul，这包括稀释试剂的稀释液的量。而其它型号，可能不能多于150ul，不过这关系不大，设置多了仪器会报警的。所有机型的最低试剂加入量是15ul，但无论怎么样，都要满足不同型号仪器的最低最高反应量。
R1/R2 diluent vol 是试剂稀释的量，0-100或150ul范围可选择。对于浓缩试剂来说很有用，但对于国产试剂来说，稀释毫无必要。不稀释的话，输入0,。如果选择稀释，在R1/R2 volume输入浓缩试剂量，在R1/R2 diluent vol输入稀释液的量。比如R1/R2 volume输入20ul，R1/R2 diluent vol输入80ul，那就是1:5稀释。
在advia的机型里，低反应容量是它的亮点，Advia2400最低仅需要60ul反应量就够了，所以输入参数之前，要算好比例。
Serum reac.s.vol 是样本加入量，也就是稀释后加入反应杯的量；
Serume dil.method 是样本稀释方法，有Standard标准、Special指定、None不选择三种方式。稀释比例会在浓度或活性计算的时候自动乘入。
Serum dil.s.vol 是稀释前的样本量，也就是从样本盘加入到稀释盘的量；
Serum dil.volume 是样本稀释液的加入量，也就是在稀释盘进行稀释时，需要加入的稀释液的量。
设备默认是标准稀释方法，也就是稀释前的样本量为30ul，稀释液量为120ul，这样就是1:5的稀释比例。指定就是任意设置，可以最大设置成1:75，但无论怎么设置，都要知道在稀释盘里，死腔量是35ul，也就是说35ul及以下不能被吸取。如果你的样本总需要是100ul，那么就必须保证稀释盘里的样本和稀释液总量大于135ul。
而稀释盘上的稀释杯最大容量不能超过300ul，所以还要算好整个稀释比例。
虽然厂家在设置上有不稀释功能，但实际条件却限制死了。原始样本针最大吸取量只有30ul，而稀释盘的死腔量却是35ul，就算30ul样本全部转移到稀释盘，也几乎不可能被样本针转移到反应盘。
说明书上的解释是如果选择不稀释，则Serum reac.s.vol输入的样本量将从原始样本盘转移到稀释样本盘，再转移到反应盘，这是不可能完成的任务。
Serum dil.posit 是指稀释液的位置，如果采用机内配备的生理盐水，则输入0。如果需要特殊的稀释液，就要在冷藏样本盘里放入特殊稀释液，并把位置输入在这里。冷藏样本盘的位置号在1-61范围内选择。
UrineSet 是尿液样本设置，在弹出的窗口里，设置针对尿液标本的参数，与血清标本一样，数值有些不同罢了。
Reaction time 是反应时间选择，3, 4, 5, 10, 15, 21分钟可供选择，默认选择10分钟，如果超过10分钟，整机速度将被拉低很多。
Reagent1/2 stir 是指试剂加入后的搅拌强度，有Strong强和Weak弱两种选择。强搅拌是总共旋转198次，正反交换8次。弱搅拌是总共旋转198次，正反交换4次。很多曲线上表现R2之前有波浪，或者R2加入之后有波浪现象，造成结果不稳（特别是两点终点法），或者速率反应线性差重复性不好，大多是默认Weak弱搅拌有关。但过多选择强搅拌，要考虑交叉污染的可能，特别是反应总量过大的情况下，容易将反应液溢出。
Sub-analyticalconditions 子分析条件
图46 Sub-analyticalconditions 子分析条件
Name 项目缩写
Digits结果的小数点位数
M.wave.L. 主波长
S.wave.L.付波长
Analy.mthd 分析方法，有EPA终点法、RRA速率法、2PA两点法、CRA固定点法、IMA免疫比浊法可供选择，常用的是前三种。
Calc.mthd 计算方法，有ABS吸光度因数法、STD单点定标法、MSTD多点定标法三种方法。
Qualit.judg定性判断，有Not do 不选择和Do 选择两个选项。如果选择Do，就要设定Quality Set。
这个功能是指定超过正常范围的样本不显示具体的数值，而是用定性方式来显示，比如我们常见的阴性或阳性，+或者-等符号。需要在Quality Set窗口设置定性类型和样本类型，以及判定范围。
Real-timecorrection formula实时校正公式，设置一个新的公式或修改已有的公式，对定标偏差的项目进行实时校正。这一项很少使用，但确实有用。
Reanalysisconditions 自动重测条件设定
图47 Reanalysis conditions 自动重测条件设定
这是采用自动重测模式的设置，当超过正常范围，或者超过速率法预设的Blank u/d 或Sample u/d 值、终点法预设的Re.absorb （u/d）时，设备自动重测该样本，并减量或增量样本，或改变样本的稀释比例。如果不使用自动重测功能，输入0和选择None即可。
Standard settings 校准设置
图48 Standardsettings 校准设置
BLK H/L 是试剂空白吸光度的高低限制，超过此范围，会U/D提示，定标将失败；
STD H/L 是校准液的吸光度高低限制，超过此范围，会U/D提示，定标将失败；
FV 是靶值，如果在Calc.mthd选择ABS，那么这里输入因数值，如果Calc.mthd选择STD，这里输入浓度值或活性值，但如果Calc.mthd选择MSTD，那么这里不填，默认为1.0000。
Abnml (serum) H/L 是血清标本危急值范围的高低值，超过此范围，结果将用H/L标示；
Abnml (urine) H/L 是尿液标本危急值范围的高低值，超过此范围，结果将用H/L标示。
如果所有限制不监测，可输入±9.9999，千万不要输入0。
Normalvalue set 正常值设定，在这个窗口里输入年龄和正常范围，超过这个范围，会用h/l标示，但很少有人在这个地方设置，都在LIS上设置。
Multi-STD 多点定标设置，见图11和图21及其解释。
Calculationmethod setting 计算方法设置
图49 Calculation methodsetting 计算方法设置
这里选择读点和前带监测以及读点前移设置和其它检查设置。
M-DET.P.l 是读点前移点，请参考前面的介绍，如果不启用读点前移功能，此点设为0；
M-DET.P.m/n是主读点区间，终点法最少3个，速率法最少6个，如果设置不足，系统会自动向前补齐。
S-DET.P.p/r 是子读点区间，终点法最少3个，速率法最少6个，如果设置不足，系统会自动向前补齐。
Check D.P.I 是检查点，对于试剂性能判断，特别是底物耗尽的判断很有帮助。如果不启用底物耗尽判断和读点前移技术，此点设为0。
limit value 变量范围值，当反应吸光度值与试剂空白的差的绝对值小于这个范围时，不进行变量判断。
Variance 变量，当试剂空白小于这个值的话，变量检查不启用，大于此值则*号提示。limit value和Variance是用于离散度检查的设置，一般不启用，都是默认值。
Prozone 前带监测，这些前面都详细说过，不再重复。
IMA Settings 免疫比浊方法设置，如果选择IMA方法，必须设置。
Reac.typ反应方向，Dec.(decrease)下降反应和Inc. (increase)上升反应。
Reaction Rate method 速率反应监测
Factor 线性系数。速率反应主读点中，所有读点都应该在一个线性范围内，超过这个范围系统会报告线性错误。
Cycle 线性检查点。也就是说，线性检查几个点才判定为线性失败。
E2 corre 是否采用E2修正，前面说过的底物耗尽判断。
Blank u/d 试剂空白吸光度高低限制；
Sample u/d 样本吸光度高低限制；
Endpoint method 终点法反应监测；
Re.absorb （u/d） 结果自动重测的高低限制。
以上就是Advia系列的参数设置介绍，下面举几个实际设置的例子：
图50 TBil参数设置举例
图中红字部分是每一个项目必须要填写的，黑字部分可以不填，全部默认。这样可以保证最低限度的正常使用。所谓的最低限度，是没有底物耗尽监测和前带监测，也不使用定性判断、自动重测。
黄底部分是定标界面，厂家出版参数说明的时候，把这一部分挪在这里，很方便。
这是双试剂终点法的例子，读点是advia1650/1800的。
图51 ALT参数设置举例-Advia2400
图52 AFP参数设置举例-Advia2400
图53 单试剂CHOL参数设置举例-Advia2400
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