注册登录才能更好的浏览或提问。
您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?立即注册
×
全自动加样系统和全自动酶标分析系统优化组合模式初探 谭明科(郴州市中心血站,湖南郴州 423000)
在使用全自动加样系统和全自动酶标分析系统中,笔者探索出一种组合模式,使全自动加样系统和全自动酶标分析系统完善结合,使运行时达到省时省力的效果。简介如下:
1、 仪器 软件 试剂
1.1 仪器和软件 MicroLab STAR和MicroLab STAR用户软件2.0版本。24/20型FAME和FANE User Software Version 用户软件2.1版本由瑞士哈美顿公司提供.
1.2 试剂 厦门新创HBsAg、抗-HCV、抗-HIV试剂;北京万泰HBsAg、河南理利抗-HCV、抗-HIV试剂。
2、 STAR和FAME实验步骤的编制和设计
2.1 STAR实验步骤的编制和设计:进样→进板架→加新创抗-HCV稀释液→加理利抗-HCV稀释液→加理利抗-HIV稀释液→加样(初/复检6块板一次完成)→加质控品(设空白2孔,阴性3孔,阳性2孔,质控1孔)→创建条码文件。
2.1 FAME实验步骤的编制和设计:见表1
表1 :初、复检FAME实验步骤的编制和设计
|
新创 |
万泰 |
理利 |
HBsAg |
抗HCV |
抗HIV |
HBsAg |
抗HCV |
抗HIV |
准备板 |
时间(min) |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
|
孵育 |
温度(℃) |
37±2 |
37±2 |
|
37±2 |
37±2 |
37±2 |
|
时间(min) |
—— |
25±2 |
—— |
—— |
20±2 |
30±2 |
洗涤 |
板洗涤模式(遍) |
|
5 |
|
|
6 |
6 |
|
浸泡时间(S) |
|
20 |
|
|
20 |
20 |
加酶 |
量(50μL/孔) |
50 |
100 |
50 |
50 |
100 |
100 |
孵育 |
温度(℃) |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
|
时间(min) |
60±5 |
25±5 |
60±5 |
60±5 |
15±2 |
20±2 |
洗涤 |
板洗涤模式(遍) |
5 |
5 |
5 |
5 |
6 |
6 |
|
浸泡时间 (S) |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
加底物 |
量(100μL/孔) |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
孵育 |
温度(℃) |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
37±2 |
|
时间(min) |
15±2 |
10±2 |
15±2 |
10±2 |
10±2 |
10±2 |
加终止液 |
量(100μL/孔) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
振荡 |
时间(S) |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
比色 |
测量波长(nm) |
450 |
450 |
450 |
450 |
450 |
450 |
|
参考波长(nm) |
620 |
620 |
620 |
620 |
620 |
620 |
3、 设备设置
3.1 STAR设备设置:高级选项RS232,加样通道8,采用纲针模式,24针交替进行。
3.2 FAME设备设置:装载模式设置为自动模式,时间安排模式设置为距前一板架20分钟和0分钟,分别用20min和0min表示。运行过程中由软件程序自动优化安排。
4、 FAME工作表的排列模式:用“1”表示初检厦门新创HBsAg、抗-HCV、抗-HIV试剂,用“2”表示复检万泰HBsAg、理利抗-HCV、抗-HIV试剂。
4.1 当1≤Sampler≤88时,有两种排列方式,见表2: 表2:当1≤Sampler≤88时的两种排列方式:
排列模式 |
运行时间 |
20min |
0min |
1 1 2 |
1h 43min |
1h 49min |
2 2 1 |
1h 47min |
1h 42min |
4.2 当88<Sampler≤176时的6种排列方式,见表3:
表3:当88<Sampler≤176时的6种排列方式
排列模式 |
运行时间 |
20min |
0min |
1 1 2 1 2 |
2h 39min |
2h 59min |
2 2 1 1 2 |
2h 31min |
2h 25min |
3 1 1 2 2 |
2h 35min |
2h 53min |
4 1 2 2 1 |
2h 47min |
2h 58min |
5 2 1 2 1 |
2h 25min |
2h 56min |
6 2 2 1 1 |
2h 55min |
2h 50min |
4.3 当176<Sampler≤264时,有20种排列方式,见表4。
表4:当176<Sampler≤264时的种排列方式
排列模式 |
运行时间 |
20min |
0min |
1 1 2 1 2 2 1 |
3h 46min |
4h 26min |
2 1 2 2 1 2 1 |
3h 35min |
4h 06min |
3 1 2 2 1 1 2 |
3h 38min |
3h 37min |
4 1 2 1 2 1 2 |
3h 47min |
4h 03min |
5 2 1 2 1 2 1 |
4h 39min |
4h 06min |
6 2 1 2 1 1 2 |
4h 02min |
3h 45min |
7 2 1 1 2 1 2 |
3h 51min |
3h 26min |
8 2 1 1 2 2 1 |
3h 53min |
3h 28min |
9 1 1 1 2 2 2 |
3h 57 min |
3h 39min |
10 1 1 2 2 2 1 |
3h 43 min |
3h 50min |
11 1 1 2 1 2 2 |
3h 35 min |
3h 30min |
12 1 1 2 2 1 2 |
3h 34min |
3h 42min |
13 1 2 1 1 2 2 |
3h 34min |
4h 03min |
14 1 2 2 2 1 1 |
3h 37min |
3h 50min |
15 2 2 2 1 1 1 |
3h 38min |
3h 40min |
16 2 1 2 2 1 1 |
3h 52 min |
4h 35min |
17 2 1 1 1 2 2 |
3h 36min |
3h 34min |
18 2 2 1 1 1 2 |
3h 30min |
3h 57min |
19 2 2 1 2 1 1 |
3h 32min |
3h 44min |
20 2 2 1 1 2 1 |
3h 46min |
3h 39min |
从表2、表3中可见,STAR加样速度一定,当1≤Sampler≤88时,FAME工作表的排列模式对FAME运行速度影响不大;当88<Sampler≤176时,FAME工作表的排列模式对FAME运行速度有一定的影响;当176<Sampler≤264时,FAME工作表的排列模式对FAME运行速度有较大影响,最快的FAME工作表的排列模式比最慢的FAME工作表的排列模式缩时近1/3(FAME最快运行速度为3h26min,最慢运行速度为4h39min);实验速度还取决于STAR的加样速度,我市无偿献血达100%,所以同一样本采用初、复检加样一次完成,其效率远大于初、复检分开加样。从表4不难看出,在实际能运行的8种模式中,以模式7或模式8同时设置距前一板架0min运行速度最快,效率最高。
5.2 是否距前一板架延迟20min,对FAME影响运行速度影响不一。当88<Sampler≤176时,应同时考虑第二架第一板与前一回最后一板的间隔时间,以加样时间略大于间隔时间为宜。当88<Sampler≤176,虽然表3中模式2和模式5均可达到最佳运行效果,但模式5第二架第一板与前一加最后一板的间隔时间不到20min,所以模式2为宜。实际上,当Sampler>176时,也只须考虑第二架第一板与第一架最后一板的间隔时间,因第二架第一与前一架最后一板的间隔时间远远大于加样时间。
|