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凝血酶原时间测定试剂盒(PT)
一、适用范围：筛选外源性凝血因子缺乏、监测口服抗凝剂的治疗，评估肝脏合成功能。
二、原理：在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血活酶转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，凝块形成的时间与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。
三、操作步骤：
A．制备样品及试剂
1． 制备待测血浆样品：静脉采血，109mmol/L枸橼酸钠与全血按1：9比例混合均匀。以2500´g离心15分钟，用塑料移液管取出血浆，血浆样品必须在4小时内进行测试。
2． PT试剂：在每瓶凝血活酶干粉中准确加入1.0ml的PT缓冲液，轻轻混匀后置于仪器的37℃试剂预温孔内，试剂预温时间必须大于10分钟，使用前必须摇匀。
3． 如需配制正常参考血浆（或正常质控血浆、异常质控血浆），请按各自的相关说明书配制。
B．测定
以LG-PABER凝血因子分析仪为例，操作步骤如下
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先加入测试珠，然后将待测血浆（或正常参考血浆、正常质控血浆、异常质控血浆）加入测试杯中 |
50ul |
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样品于37℃预温区准确预温180秒 |
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将预温后的37℃PT试剂加入上述测试杯 |
100ul |
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立即启动仪器进行自动测试，记录结果并换算INR值 |
C．其它自动化仪器测定
参照相应的仪器操作手册。
四、注意事项：
1.试剂及缓冲液严禁冰冻
2.不同批号的试剂盒各组分不能混合使用。
3.在测定过程中，所有试管、移液管、注射器必须是塑料的。
4.待测样品不能采用肝素、EDTA抗凝，应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。
5.为防止在测定过程中V、Ⅷ因子的损失，预温时间要准确为180秒，预温温度应保持在36.5℃－37.5℃。
6.如果血球压积<20%或>55%，需按下列公式调整血样与抗凝剂的比例：抗凝剂用量=0.00185×血量（ml）×（100-病人红细胞压积）。
7.溶血标本不得使用，必须重新采样。
8. 每个实验室必须有一套质量控制程序，这包括采用正常和异常对照来评估仪器、试剂及技术操作。如果对照血浆所得测试结果不在参照范围内，那么病人的测定结果将被认为是无效的。
9. 试剂用后应及时置于2℃－6℃保存，以延长试剂的寿命。
五、临床意义：PT时间延长：表示凝血酶原或Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ等因子中一种或多种不足，或纤维蛋白原明显减少，或在应用抗凝药物后。当单一凝血因子异常时，其活性要减少到一定水平之下，PT才显异常。如因子Ⅰ（纤维蛋白原）要在1000mg/l以下；因子Ⅶ要在5%以下；因子Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅹ要在10%以下。上述凝血因子异常有先天性或获得性缺乏之别。后者见于严重肝病（肝合成维生素K依赖因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ）维生素K缺乏、纤溶亢进、播散性血管内凝血晚期等。
PT时间缩短：见于先天性Ⅴ因子增多症、血液高凝状态如心肌梗死、脑血栓形成、血栓性静脉炎、多发性骨髓瘤、乙醚麻醉后。
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