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HBsAg 检测的标准操作程序

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郑振寰 发表于 2006-10-27 16:16 | 显示全部楼层 |阅读模式

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HBsAg 检测的标准操作程序

实验室名称

项目

编号

制定日期

******

ELISA方法

******

**年**月**日

目的

保证检测结果准确可靠.

该SOP变动程序

本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。

标本的采取和保存

随机静脉血2ml,分离血清备用。也可使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免无溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。

操作程序

1.实验准备:从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1:20稀释。

2.加待测标本:加入待测标本每孔0.05毫升,并设HBsAg阳性对照2孔,HBsAg阴性对照2孔,空白对照1孔。

3.加酶结合物:每孔0.05毫升,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。

4.洗 板:

1)手工洗板:弃去反应板条孔内液体拍干;用洗涤液注满每孔,静置5—10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。

2)洗板机洗板:选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。

5.加显色剂:先加显色剂A,每孔0.05毫升;再加显色剂B,每孔0.05毫升;充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。

6.终止反应:每孔加入终止液0.05毫升,混匀。

7.测定:用酶标仪读数,可选择唯波长450nm(以空白孔校零)或双波长450/630nm,读取各孔OD值。

结果判断

Cutoff值计算:COV=阴性对照平均OD值×2.1

标本OD值>COV为阳性,标本OD值<COV为阴性

注:阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。

注意事项

1.试剂使用前应摇匀,并弃去1-2滴后垂直滴加,注意均匀用力。

2.从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内贮藏备用。

3.洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

4.不同批号试剂请勿通用。

5.结果判断须在10分钟内完成。

6.封片不能重复使用。

7.用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。

操作人员 部门主管 质量负责人

姓名 ****** ****** ******

日期 **年**月**日


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