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杨燕，孙荣同，丛栋滋 【摘要】 目的 探讨全自动生化分析仪的试剂的合理排序，以提高检测的准确度。方法 终点法、酶法在不同条件下测定结果的比较。结果 试剂排序不合理影响结果准确度。结论 全自动生化分析仪的应用，应注意试剂的合理排列，以提高检测结果的准确性。
【关键词】 试剂排序；误差；准确度
全自动生化分析仪的自净率是有限的，随着仪器使用周期延长及多种主客观因素的影响，增加了试剂探针污染携带率，检测试剂排序不当，就可能出现不可逆转的误差，直接影响检测结果的可靠性，很容易给临床造成无效数据，直接影响临床诊疗水平。通过长期临床检测实践并参考相关文献内容，归纳出临床生化检测试剂的排列顺序，使同一份标本在进行多项目检测时，尽量减小因试剂间相互干扰引起的误差，提高了批检测结果的准确性。
1 材料与方法
1.1 检测标本
（1）待检血清：门诊、住院病人静脉血清；（2）质控血清：Roche公司提供；（3）标准液：Roche公司、北京利德曼生化技术有限公司提供。
1.2 检测试剂
Roche原装及北京利德曼生化技术有限公司成品试剂盒。
1.3 检测仪器
Roche MODULAR 2p生化分析仪。
1.4 检测方法
各检测项目参数通过电脑输入，操作严格按照仪器使用手册及试剂说明进行。
2 结果与原则
2.1 试剂的排列顺序与方法学
见表1。表1 试剂的排列顺序与方法学（略）
2.2 试剂排序原则
2.2.1 按反应所需pH
（1）pH＜5放在前。如DBI、TBI、ALB；（2）pH≈7。如ALT、AST、HBDH、BUN、CK-MB、CK、Cho、TG、HDL、Glu、UA；（3）pH＞8。如：γ-GT、ALP、LDH、Ca、GSP、Cr、TP。
2.2.2 按试剂所含成分
（1）缓冲液成分。如磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液；（2）辅酶种类。如NADH、NADPH。
2.2.3 按检测反应的性质
（1）终点法，速率法，免疫比浊法；（2）双缩脲法测TP放于末位，利用双缩脲试剂去蛋白去污的作用；（3）苦味酸试剂污染较重，且不易清除，尽量往后面放。
2.3 实验结果
2.3.1 终点法
见表2、表3。表2 pH值的影响（略）表3 反应物干扰（略）
2.3.2 速率法
见表4、表5。表4 pH值的影响（略）表5 反应物的影响（略）
3 结论与分析
3.1 结论
检测试剂合理有序排列，能减少探针携带误差，提高检测结果的准确度。
3.2 分析
3.2.1 终点反应
（1）pH值改变：反应物之间，反应物缓冲液之间因携带误差而使pH值改变，反应达不到终点。如双缩脲法测血清总蛋白，若其他条件相同，反应在碱性(pH值8～9)条件时，蛋白肽键（—CONH）才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，完全测出血清蛋白的总量。若pH＜8时，总蛋白测定结果偏低，直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。（2）缓冲液混入反应物：磷酸盐缓冲液混入无机磷试剂，会使检测结果偏高。应将含有磷酸盐缓冲液的检测项目放于无机磷后检测。如GOD-POP法测Glu。
3.2.2 速率法反应
（1）辅酶结构：辅酶参与反应时，其还原型、氧化型在340nm处曲线变化是相悖的，由携带误差使上升反应或下降反应不彻底，导致无效值出现。（2）最适pH值：酶活力测定在最适pH值时，反应最快，灵敏度最高，但是因为缓冲能力有限，可因携带误差使酶促反应出现无效值。大多数酶反应pH值在6.0～7.5之间；ALP、γ-GT、LDH须在碱性条件下最适宜。
3.2.3 反应物间的作用
（1）CK检测不应在ALP、Ca检测之间，因CK反应液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，结合Ca而使结果偏低。（2）ALT、AST反应液中均含有LDH，可干扰LDH检测结果。（3）Cho,Glu,UA,HBDH用PBS缓冲液，干扰无机磷测定。（4）BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶（GLDH）消耗NADH，不易放在底物NADH如ALT、AST项目前检测。（5）同时测定一个项目的不同标本（血、尿、脑脊液等）：应将不同标本放入不同通道测定。临床生化检测应注重试剂的合理排序，严格按规程操作，及时清除试剂瓶口处结晶，以免导致试剂水平检测错误；对于稳定性差的试剂尽量减少与空气接触面积；有沉淀、变浑浊及颜色异常改变的试剂及时更换，尽量清除无效值，提高生化检测的实效性；为临床诊断发挥其应有的作用。
作者单位： 264200 山东威海，威海市立医院检验科
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