[转发]开放式全自动生化仪的程序编辑

安徽省六安市第二人民医院检验科 许华斌

现在，越来越多的全自动生化分析仪装备到各级医院检验科。大型全自动生化分析仪一般都有配套的试剂供应。国内各大试剂供应商也有供其专用的试剂包装并提供上机参数。这些大型设备主要是日本、奥林巴斯、贝克曼等市场主导品牌的仪器。由于受经济支付能力和标本量等诸多原因的制约，各级中小医院所使用的全自动生化分析仪多在每小时300次左右，且品牌、型号众多。一般也没有配套的试剂供应。虽然这些仪器对试剂是开放的，但不同的仪器各有其特点。有时同一份标本在不同的测试系统中会得到不同的结果。以致于临床上都只承认本院的检验结果，造成了许多不必要的重复检查。因此，选择合适的试剂，编辑合理的操作程序，可以提高检验结果的准确性、重复性和可比性，提高工作效率 。作者对此进行了一些探索。现以“康微”（CheMWell）全自动生化分析仪为例进行说明。


1 标准设置
全自动生化分析仪一般每天都做十几个至几十个测试项目。如果每个项目都设置一个标准，势必会占用许多的样本位。而利用多项目校准血清进行校准，不仅可以节约样本位，而且还可以减少基质效应的影响。我们利用长征公司生产的临床化学综合校准血清（Level1）作为校准液，并在编程十专门起了个名称，叫做ALLStd（共同标准），并且将其位置固定。这样仅用一个样品位，一支血清，一次即可对三十多个项目进行定标，方便、快捷、节约。


2 单双波长设置
在使用普通分光光度计的手工操作时代，所有的检测项目都使用单波长；到了使用半自动生化分析仪时，虽然大部分测试也可使用双波长，但具体操作的极少设置。因为那样会降低测定速度；使用全自动生化分析仪之后，所有操作都由仪器自动完成。由于仪器会自行安排操作顺序，且比色速度极快，因此，双波长比色时间以不需要过多去考虑。使用双波长能够有效抵消电压波动及杂散光等给测定所造成的干扰。但仪器是以△A=A主波长-A副波长进行计算的，若两波长过于靠近，△A会很小，误差也会增大。从表I可以看出，双缩脲法测定TP时，545nm/340nm、545nm/700nm由于副波长时的吸光度要大于主波长时的吸光度，所得△A为负值，测定结果也降低，显然选择这两个副波长时是不合适的；单波长及其余副波长下时的测定均值相近，但单波长时的CV值较大，因此为了取得更好的重复性，全自动生化分析仪都应该选择双波长测定；虽然 540nm/505nm、540nm/600nm的CV值较低，但由于其△A很小，微小波动也可能引起较大测定误差；而545nm/450nm或者545nm/630nm时的CV值较低，△A也较大，显然是TP测定时的最佳选择。现在，许多试剂盒都给出了主、副波长参数，可供编程时参考。但在换一个新方法前，最好还是进行一些预试验，根据△A及CV值的大小选择最合适的副波长。如果选择得当，还可部分消除黄疸、脂浊等干扰。根据笔者的经验，主副波长相差100nm左右比较适合。

表1 同一份混合标本不同副波长时TP的测定值（n=30,主波长545nm）

	340 nm	700	405 nm	450 nm	505 nm	600 nm	630 nm	单波长
△A	-0.6954	-0.7062	0.1541	0.2375	0.0841	0.0953	0.2053	0.4345
X¯	61.0	24.2	67.8	67.5	67.1	67.5	67.4	68.0
CV	9.8	21.1	0.93	0.62	1.3	0.95	1.18	4.8

3 酶动力学法参数选择
3.1 生化酶学测定一般采用动力学法。所购买的商品试剂盒上也都给出了F值。按照试剂盒所给定的样品/试剂比例加入样品及试剂，可直接将F值输入参数中，而不再要求做标准。
使用十分方便。但这样做的前提是样品和试剂的加量必须准确，仪器的实测摩尔吸光度也应与理论一致，温度控制精确。如此方可在测定是直接使用F值。事实上由于各型仪器在滤光片带宽、注射器容积步进电机精度等方面有差异，进而造成了样品和试剂的加量以及吸光度的偏差。如果采用固定F值直接输入参数中，将不可避免地引入系统误差。特别是我科所使用的ChemWell全自动生化分析仪是利用垂直光路进行比色的，仪器根据反应的总体积计算光径。两个注射器的容积误差不仅影响到样本/试剂比，更是直接影响到光径的计算。因而采用固定F值进行计算对结果影响较大。张克坚等认为，在进行酶学测定时，如果分析条件的变化可同等程度地影响校准物和未知样本，则可以使用校准物进行补偿。从表2可以看出，用固定F值法（F=4127，简称F值法，下同）和带标准的速率法（标准采用长征公司生产临床化学综合校准血清，简称标准法，下同）测定一份混合血清的ALT20次，F值法的结果要比标准法低10%左右，此一误差较为恒定，因此可选用可靠的校准物加以校准。由此可见，生化酶学测定时选择带标准的速率法可大大提高检验结果的准确性及可比性。

表2 固定F值法和带标准速率法时ALT的结果比较（n=20）

	F值法	标准法
X¯ (U/L)	61	68
CV(%)	7.81	7.84

3.2 采用固定F值法进行酶动力学测定另一个需注意的问题是温度的影响。酶动力学测定对温度很敏感。目前国内大多采用37°C进行测定。冬季环境温度较低时，对于大多没有中央空调的中小实验室来说，尽管普通空调可使室温显示在20-25 °C，事实上它所提供的热能并不能持续久达这个水平。由于ChemWel的反应盘是半暴露的，因此当打开温度监视窗时，会发现随着较冷试剂的加入，反应盘的温度会逐渐降低。尽管开始测定时反应盘温度已升到37°C，但反应过程中，温度只能维持在35°C±。且反应过程中仍有可能上下波动，这对于酶学反应来说影响是很大的。如采用37°C时的固定F值，将会使测定结果降低。由于温度的波动，还会使得结果的重复性降低。为此，作者进行了如下试验:将Randox 156UE定值质控血清分成20份，在冬季（室内空调温度至20°C）分别用固定F值法和带标准的速率法测定ALT（其靶值为129U/L）。打开温度监视窗口，会发现随着反应的进行，反应盘的温度会逐渐由37°C降至35°C±，并相对稳定。从表3可以看出，ALT在35°C±时F值法的测定结果比靶值低约50%左右，CV值高达15.9%，结果临床已不可接受。而标准法的结果与靶值较接近，但批内CV值仍较大。在将室内温度提高到25°C，试剂平衡至室温，并让反应盘无分加热到37°C以后，再用上述定值质控血清连续20次测定ALT，监测表明反应温度恒定37°C。表3看出，37°C时的CV值要比35°C±时的CV值小得多，且标准测定均值与定值质控血清靶值相同。所以，实验室应该创造条件，力争使环境温度达到仪器要求。

表3 Randox 156UE定值质控血清在不同反应温度下ALT的测定结果比较（n=20）

	35°C±		37°C±
	F值法	标准法	F值法	标准法
X¯	85.7	131.1	117.5	128.9
CV	15.9	8.21	4.68	4.72

3.3输入固定f值时，仪器是以△A×F进行计算的。因为△A=△A1-△A2，而△A1=△A1主波长-△A1副波长，△A2=△A2主波长-△A2副波长……，因此主副、波长的选择越接近，则A副波长与△A主波长越接近，△A就越小。如前所述，虽然这样可减少因电压波动及杂散光等的干扰，但由于△A降低，F值固定不变，也会引起结果降低。解决问题的办法仍然是采用带标准的速率法。
综上所述，酶学测定时采用带标准的速率法，不仅可抵消注射器容积、光径、滤光板波长带宽及杂散光等所带来的误差，更能消除温度波动给结果所造成的影响。大大提高了酶法测定的准确性和重复性。这是我们在编程和操作过程中所必须重视的问题。在冬季环境气温低时，应该每批测定都带上标准。若室温较高，反应盘温度恒定时，则可与终点法一样，定期定标一次。

向各位前辈讨教！铁测质控结果错，但测样本时就会忽高忽低！请帮分析一下！！！！！