[转发]APTT操作规程一例SOP

活化部分凝血活酶时间测定（APTT）
一、项目名称：
活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time, APTT）
二、检验方法名称：
凝结法
三、方法学原理：
在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂。加入试剂后，采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method方法求得凝血时间。
四、方法学溯源：
37℃条件下，以白陶土激活因子Ⅻ和Ⅺ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，在Ca²+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。
五、仪器：
（一）型号：Sysmex CA—1500自动血液凝血分析仪
（二）分析和计算参数：
1．处理量：约120个测试/小时
2．所需样本量：50μl
3．检验时间：在最长检验时间之内测出结果，典型最长检验时间：190秒
4．重复性：CV≤2%
六、试剂及配套品：
（一）试剂：
1. 肌动蛋白活化Cephaloplastin试剂（Dade® Actin® Activated Cephaloplastin Reagent）
（1）商标：德灵（DADE BEHRING）
（2）包装规格：Pack for 10×4ml
（3）代码：B4218 G1 E0533 (0450) H/W
（4）成分：
脑磷脂（从干燥兔脑粉中提取）加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣酸溶液。
2. 氯化钙溶液（Calcium Chloride Solution）
（1）商标：德灵（DADE BEHRING）
（2）包装规格：Pack for 6×15ml
（3）代码：ORHO 33
（4）成分：0.025mol/L的氯化钙溶液
3．佛罗那巴比妥缓冲液（Dade® Owren'S Veronal Buffer）
（1）商标：德灵（DADE BEHRING）
（2）包装规格：Pack for 10×10ml
（3）代码：B4234 G25 E0533 （0461）W
（4）成分：
1）2.84×10­²M的巴比妥钠 (sodium barbital)
2）1.25×10­¹M的氯化钠 (sodium chloride)
3) PH 7.35±0.1
4. 清洗液（Cleaning）
2%次氯酸钠溶液（自配）
（二）配套品：
1.标准血浆（Standard Human Plasma）
(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）
(2) 代码：No. ORKL
2.校准质控血浆（Ci-Trol®）
(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）
(2) 代码：Level 1, B4244-10
Level 2, B4244-20
Level 3, B4244-30
3.质控血浆（Control Plasma）
(1) 商标：太平洋（Pacific Hemostasis）
(2) 代码及规格：Level 1 (Normal), 100595 10×1ml
Level 2 (Abnormal), 100596 10×1ml
Level 3 (Abnormal), 100597 10×1ml
七、操作步骤：
（一） 开机：开机前，先打开连机的打印机。按下机器右边的POWER按钮。开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready”时可以进行试验。
（二）洗针：在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行洗针。
（三）准备试剂：按照仪器试剂位置程序要求，把每一项的试剂准备好，放在相应的位置。
（四）准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10个样本），准备好放在进样器上。
（五）准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子，查看反应杯是否够量，需及时添加。
（六）输入试验项目：按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击APTT，使APTT键由“—”变为“O”。如有需要按屏幕下的“Repeat”键，仪器会自动重复十个样本的检测项目与第一个样本相同。屏幕右边的光标移动键，按下“NEXT”表示翻到下一个界面，按“↑”表示向上移动光标，“←或→”表示下一个界面试验项目。
（七）输入样本号：按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号。
（八）开始检测：待一切准备工作就绪，按下仪器右上角“START”键，仪器开始工作。
（九）查看结果：返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下“Stored Date”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，检测的结果会自动传输到此画面，如果查看反应趋势图，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝集趋势、吸光度、结果等。
（十）洗针：当做完一批标本以后，需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行洗针。
（十一）关机：回到主屏幕下，在洗完针以后方可关机，切断电源，关闭打印机。
八、 参考范围：
APTT (sec)：31—43s
九、 临床意义：
（一） 受检者的测定值较正常对照延长超过10s以上才有病理意义。
（二）对内源凝血途径因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）缺乏较CT敏感（血小板异常不影响APTT）能检出Ⅷ：C小于25%的轻型血友病。对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感，故APTT延长的最常见疾病为血友病。此时可进一步做纠正试验，即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清（试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验），再做APTT，如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正，则为因子Ⅷ缺乏；如吸附血浆不能纠正，其余两者都能纠正，则为因子Ⅸ缺乏；如三者都不能纠正，则为病理性循环抗凝物质。
（三）在使用肝素治疗时，多用APTT监测药物用量，一般以维持结果为基础值的2倍左右（1.5—3.0倍）为宜（75—100s之间）。但应事先检测所用部分凝血活酶试剂是否对肝素敏感，即向正常人血浆中加入不同量肝素（从每毫升0.1—1.0IU），看其APTT是否相应延长。
十、病人准备和标本要求：
（一）采血时，首先应该确认病人姓名，并且将姓名和编号写在真空采血管的标签处。
（二）尽可能保证每次采血都在同样的条件下进行，即病人处于休息状态，并且在早餐前采血。
（三）凝血实验标本最好不与其它实验一起采集，否则由于标本的分配、分装等而使血液停留在针管的时间延长。
（二）取血时，病人应松弛，环境温暖，防止静脉痉挛，止血带的压力应尽可能小，取血速度平稳顺利，防止产生气泡。
（三）用定量为3毫升的一次性枸橼酸钠（0.11mol/L）真空采血管采血至指定刻度，抽血不足可使结果假性延长。取血完毕立即轻轻颠倒混均混合均匀，不要剧烈震荡，并避免产生气泡。
（四）及时离心，3000转/分离心标本10分钟，以除去血小板。
（五）务必于采血后3小时内测定完毕,如不能完成试验，冷冻贮存少量血浆（0.5—1ml）（最好在-70℃，或者当贮存时间较短时，可以置于-20℃条件下），在实验前将血浆于37℃下快速融化。血浆用塑料试管存放，并用塑料吸管移取标本。
十一、操作注意事项：
（一） 许多的实验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及PH值上很小的变化都会导致试验结果明显的变化。孵育时间与温度是凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37°C下放置10min。
（二） 实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血或出现凝块。
十二、编写者：
日 期：
十三、科主任签字：