[转发]使用微生物半自动化培养鉴定系统遇到的问题及解决方法

邵小华
我们现在使用的是ATB Expression半自动细菌鉴定和药敏分析系统，由法国梅里埃集团生产，ATB使API系统(属手工操作系统，已有25年以上历史)自动化和电脑化，除配制、接种菌液为手工外，其他步骤均为自动操作，提供了标准，简单及准确的比浊及加样程序，大大消除了实验过程中的个体差异；此外，传统的微量生化实验，通常是怀疑为某种菌落，再来选择生化实验的种类，而细菌自动鉴定仪只是根据G 或G 、细菌形态、氧化酶及OF反应来决定鉴定板条的选择。ATB Expression半自动细菌鉴定仪工作原理就是利用特定的反应试条，通过阅读器自动阅读试条，根据试条的生化反应数据进行统计分析，根据相似程度(T值)及百分概率( ID)的组合，作出判断。可鉴定包括全部有临床意义的病原菌。
BACT／AI ERT3D 6O全自动血培养仪，采用比色计传感器和反射光，利用检测溶于培养基中的c() 的产生和存在状况。如果检测样本中存在有微生物，当微生物在培养基中代谢酶产物时会产生二氧化碳，放置在培养瓶底部的传感器的颜色就会从蓝绿色变成黄色。它是通过光电原理，采用三种判断方式判断细菌生长。连续震荡培养，每1O分钟检测1次，能使血培养阳性检出时间缩短，阳性率提高，检出细菌种类增多，污染机会减少。
一、在使用梅里埃ATB Expression半自动细菌鉴定和药敏分析系统时，将加好待测菌液的鉴定和／或药敏测试板条直接放入湿盒，置35℃ 培养箱培养，经过一段时间的培养后，取出测试板，其底面吸附很多的水蒸气，此时若进行测定，仪器不能识别，无法判读。只有将测试板条底面的水蒸气擦拭干净，仪器方可判读，擦拭水蒸气时又需十分小心，否则培养液弄溢出将影响测试结果。通过改进孵育方式，可解决这个问题。
具体操作如下：先将包装板条的塑料盖放入湿盒，再将待孵育的待测板条放置其上，然后置35。C培养箱培养。这样稍作改进后水蒸气则吸附在包装板条的塑料盖上，待测板条的底面不会含有水蒸气可顺利进行测试
二、由于鉴定(ID)板条和药敏(ATB)板条32个反应小孔内只有55“l或135 F1的菌液，工作中由于种种原因造成板条小孔内菌液干涸ATB Expression鉴定药敏系统不能识别判读。需重新进行测试n]。笔者通过摸索发现，遇此情况可根据板条的不同分别在每孔加入55 l或135F1的蒸馏水或生理盐水以恢复其反应性，再进行测定即可得到正确的结果。无需重
复测试。
三、在选择革兰阴性杆菌鉴定板条(ID)和药敏板条(ATB)时不能只依据氧化酶的结果来选择，因为不动杆菌、窄食假单胞菌等，这些菌虽然是非发酵菌但其氧化酶为阴性。如一待鉴定的革兰阴性杆菌，根据仪器操做流程氧化酶阴性选用ID32 E，ATB G一5这两种板条进行鉴定和药敏试验，鉴定结果显示该菌为不动杆菌，药敏试验则显示ATB G一5药敏版条不合适，重选择。因为药敏板条ATB G一5上的药物浓度不适合检测非发酵菌，故需换ATB PSE药敏板条重做。这样既浪费材料又延长了报告检验结果的时间。所以，在对革兰阴性杆菌进行药敏试验时一定要依据氧化酶及OF的结果来选择测试板条。
四、对于来自小儿患者的标本，做药敏实验时我们采用的是K—B法。因为小儿患者有多种抗生素药不能用如：喹诺酮类，氨基糖甙类等，虽然ATB板条是按照NCCLS标准制作的，具有许多优点，但它上面包含有多种儿科不能使用的药物。我们听取儿科专家的建议，选择几种儿科常用药，用K—B法进行药物敏感试验，这样既节省了材料又减少了病人的经济负担。也能满足临床治疗的需求。
五、血培养仪一般设置培养时间为五或七天，当培养五或七天血培养仪提示阴性结果时，以前我们就此报告培养五或七天无菌生长。现在我们将血培养仪培养七天提示阴性的标本，盲种一块血平板，结果发现有极少数标本，血平板．k仍有细菌生长(排除污染菌)。我们曾从小儿科l例血培养仪培养七天无菌生长提示阴性的血标本中分离培养出一株少动鞘氨醇单胞菌。
可能由于有些菌生长缓慢，生长代谢的产物CO 的量少与培养瓶底部的CO。感受器发生的颜色反应所产生的吸光度没有达到仪器所检测的阈值。因此，在血培养仪中培养七天提示阴性结果的标本需盲种一块血平板，35℃培养24小时后仍无菌生长者，方可报告培养七天无菌生长。如血平板上有菌生长，则按照操作规程进行鉴定和药敏试验，报告结果。
在实际工作应用中我还发现当信号显示阳性时，需尽快取出阳性瓶 ，以避免由于自我分解或其他原因引起无活性培养。某些肺炎链球菌在报告阳性后如果没有立即移出特别容易发生自溶现象。由于血样中有大量的白细胞，有可能引起BacT／A1ERT阳性，这种情况较少发生，可通过直接涂片和次代培养阴性来排除假阳性 。应建议临床医护人员血液样本应在8ml以上10 ml以内，尽管也可用较小量样本，但如果样本量较少会减少成功分离细菌的成功性。如果样本量过大，则难以维持到适当的标本与培养基的比率。
由此可见，虽然现代化、自动化细菌培养鉴定技术给病原微生物的鉴定提供了便捷可靠的依据，但掌握过硬的微生物检验技术以及在实践中不断积累经验，在病原学的鉴定中则起着不可忽视的作用。
参 考文 献
1 张 荣．ATB Expression自动细菌鉴定仪在实际工作中的应用．中国卫生检验杂志，2004；12：14(6)768(J)
2 生物梅里埃血液培养技术问题回报．第五届VITEK学术会论文集，l994：21～22(c)